klf11基因在上皮性卵巢癌中的表达及其甲基化分析

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时间:2018-12-09

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1、中文摘要中文摘要背景:妇科肿瘤中,卵巢癌的发病率居第三位,但其死亡率却居首位【l】。在过去50年中,卵巢癌死亡率居高不下,其主要原因之一是对卵巢癌的发生发展机理缺乏足够的了解,现有的治疗方案也缺乏针对性。KLFl1基因属于KLF家族成员,是一种转录抑制因子,参与并调节细胞增殖,细胞周期和细胞凋亡等多种生命活动,在TGF13信号通路中发挥重要作用。KLFI1基因与多种肿瘤的发生发展密切相关。研究表明,KLFll基因的表达量在多种肿瘤细胞【40埘,明显下调,使其抑制肿瘤细胞的作用大大降低。最近研究表明抑癌基因过度甲基化可以抑制基因的表达【5

2、引,尤其是某些抑癌基因启动子区甲基化水平的异常增高在肿瘤的发生发展过程中起到了不容忽视的作用。目的:本研究旨在探究KLFll基因在上皮性卵巢癌中的表达及其甲基化在卵巢癌发生发展过程中的作用。作为实验性研究,一方面检测上皮性卵巢癌及正常卵巢组织中KLFIl基因及相关基因Smad2、Smad3、Smad7和TGF6的表达,分析KLFIl基因在TGF13信号通路中的作用。另一方面探究KLFll基因在上皮性卵巢癌与正常卵巢组织中甲基化程度差异。方法:选取47例上皮性卵巢癌组织和13例正常卵巢组织。手术切除标本立即置液氮速冻,后转.80℃保存。提

3、取组织DNA和总RNA,将RNA反转录合成cDNA。荧光定量PCR检测KLFll、Smad2、Smad3、Smad7和TGF13基因的表达量。DNA经Bisulfite处理后,巢式PCR扩增目的基因,切胶回收,连接pGEM-T载体,转化入DH5Q感受态细胞,挑取单克隆送检测序。应用在线网站http://quma.cdb.riken.jp/对数据进行统计学分析,显著性水平P<0.05。结果:定量PCR结果显示KLFll基因在上皮性卵巢癌中的表达量明显低于正常卵巢,尤以II期上皮性卵巢癌中的平均表达量最低。Smad2及Smad3基因在上皮性

4、卵巢癌中的表达均比正常卵巢有所降低。Smad7及TGFl3基因的表达与正常卵巢相比较无统计学差异。测序结果显示上皮性卵巢癌中的甲基化概率明显高于正常卵巢,且在I期上皮性卵巢癌中最高。结论:KLFll基因作为一种转录抑制因子,在上皮性卵巢癌中的表达受到明显抑制。上皮性卵巢癌中KLFll基因启动子区高甲基化状态抑制其表达。上皮性卵巢癌早期,KLFll基因的表达抑制最明显与其此时启动子区甲基化程度最高相关,KLFll基因启动子区甲基化是上皮性卵巢癌的早期事件,DNA甲基化在上皮性卵巢癌的发生过程中起到关键作用。上皮性卵巢癌中,作为TGFB信号

5、通路下游的作用因子,KLFIl基因通过Smad2和Smad3基冈影响TGFp信号中文摘要通路,而非通过Smad7基因影响TGFB信号通路。关键词:上皮性卵巢癌,KLFll,基因表达,DNA甲基化ⅡAbstractAbstractBackground:Theincidencerateofovariancancel-isthe“rdamongallthegynecologictumors,whileitsmortalityrateisthefirstIH.Inthepast50years,thereisnosignificantimprov

6、ementinthetherapyofovariancancer.Oneofthekeyreasonsisthatthemechanismofthecarcinogenesisanddevelopmentofovariancancerisunclear.KLF11genebelongstOtheKLFfamily,asatranscriptioninhibitingfactor,KLFllregulatesmanylifeprocesses,suchascellproliferation,cellcycleandapoptosis,an

7、dfurtherplaysrolesinthegenerationanddevelopmentoftumorthrouthTGF13patyway.TheexpressionofKLF11isreducedinmanycallcers【401,anditseffectsincancerarereduced.Recentstudiesshowthatthehypennethylationoftumorsuppressorcouldsuppresstheexpressionofgene【53】,especiallythehypermethy

8、lationofthepromoterregionintumorsuppressorplaysimportantrolesinthegenerationanddevelopmentoftumom.Propo

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