野油菜黄单胞菌控制hrpg hrpx表达的调节基因的鉴定

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1、野油菜黄单胞菌控制庇伊G、庇彬表达的调节基因的鉴定摘要J}l伊(hypersensitiVereactionandpathogenicity)基因决定着病原细菌对寄主植物的致病性和诱导非寄主植物过敏反应。在野油菜黄单胞菌致病变种(物，z历D胁绷口s册唧船舫pv．c口叩船姚，勋c)中，^伊G、^帜是目前已鉴定出的控制^伊基因表达的关键调节基因，而关于矗巾G、J}l帜上游的调节基因几乎一无所知，因此，鉴定控制J}zpG、Jll秘表达的调节基因，对于研究矗节基因的表达调控机制，揭示植物病原细菌的致病机制都具有重要意义。本研究利用蔗糖敏感型自杀基因船谚作为报告基因，将报告质粒p埝口c锄彬和pL白口c励

2、伊G通过三亲本接合的方法导入揿8004功能注释为调节基因的253个突变体，从中筛选出6个候选调节基因翔∞799、Xc2253、xc3056、xcl734、xc2650昶xc225l：·在初步获得6个候选调节基因的基础上，本研究又利用缈基因作为报告基因，建立了GUS报告系统加以验证。首先构建获得GUS报告质粒p“咖妫彬和pH咖JIl伊G，然后将它们与另外两个GUS报告质粒pLGX和pLGG通过三亲本接合的方法分别导入上述候选基因对应的突变体(073G12、125H08、151D11、NKl668、PK2558和NK2168)，在MMX培养基中检测GUS活性。结果显示，与野生型妇8004相比，突变

3、体073G12、125H08、151D11、NKl668和NK2168中^印G、^啊搿基l因的表达量(即GUS活性)均表现为显著降低，表明这5个突变体所对应的基因瑚口7约、嬲225罗、獭一3仿6、二鼢刎和肥225J正向调控^印G、J}z帜基因的表达，而突变体PK2558对应的基因恩一265D非正向调控^伊G、，i彬基因的表达。通过功能反式互补，构建获得调节基因嬲225岁的突变体125H08和船3∞6的突变体151D11的互补菌株，然后进行突变体及互补菌株的表型检测。结果表明，撒n2聊和艇3∞6这两个调节基因都可影响‰c的致病能力，但基本上不影响‰c诱导辣椒EC时10R的过敏反应，也不影响融胞外

4、多糖的分泌及胞外蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的活性；调节基因配225罗可影响融的游动性及生物膜的形成，而另一调节基因獭乃∞6不影响殷c的游动性及生物膜的形成。关键词：野油菜黄单胞菌^伊G^彬调控期胡ⅡIdenti6cationofGenesControiiingtheExpressionof屁伊GandJ7l印Ⅸin黝刀砌伽D刀傩阳唧部打豇pv．缎唧口触LiuJianyuan(CollegeofAgriculture，GuangxiUniVersity，Nanning530004，China)AbstractThe^，p(hypersensitiVereactionandpathogenicity

5、)genescontroltheabilityofpathogenicbacteriatocausediseaseinhostplantsandtoelicitthehypersensitiVeI．esponseinnonhostplant．Uptonow，JIl，pGand^，】9ⅨaI．ethekeyregulato巧geneswhichcontroltheexpressionofJli甲genesin‰c，whilethefegulatorsupstreamof^甲Gand^印Ⅸarenearlyunknown．T11erefore，identificationofthegenestha

6、tregulate^，pGandJ}l，】凭YisimponanttoinVestigatetheregulato巧mechanismof^巾genesexpressionanddisseCtthepathogenicmechanismofphytopathogenicbacteria．Inthisstudy，thesucrosesensitiVesuicidegene砌c曰wasused弱areponeL’IhereporterplasmidspL白口以I}z硒ⅨandpL白口据，l伊Gweretr觚sfefredthroughtri—parentalconjugationinto253mu

7、tantsofwhichCorrespondinggeneswereannotated弱regulato巧genesillj昆c80C14．Si)【Candidateregulato巧genesO仍799，配225罗，翔乃D形，船工刀彳，翔265Dand翮?225j)werescreenedout．Onthebaseofgetting6candidateregulato巧genes，theconf