野油菜黄单胞菌论文

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1、内蒙古工业大学硕士学位论文学校代码：学号：硕士学位论文类别：全日制硕士研究生题目：野油菜黄单胞菌乙酰化酶基因的克隆及诱变英文题目:ThecloningandmutagenicacetyltransferasegeneofCampestrisXanthomonas二零一三年六月内蒙古工业大学硕士学位论文摘要野油菜黄单胞菌是黄原胶的一种生产菌种。黄原胶是由黄单胞菌经过发酵，产生的一种胞外多塘，由于它特殊的理化功能，使之应用也相当广泛。黄原胶的合成是一个既精细又复杂的过程，需要各种酶来参与，如转移酶I-V、β-淀粉酶、缩酮丙酮酸转移酶、乙酰化酶、尿

2、苷二磷酸葡萄糖脱氢酶及GumA蛋白等。应用基因工程的方法获得优良的产黄原胶菌株是一个新的研究领域。由于黄原胶的乙酰化程度与黄原胶的稳定性正相关。因此研究野游菜黄单胞菌的乙酰化酶基因对黄原胶的生产有重要影响。本课题将从基因工程的角度，对野游菜黄单胞菌的乙酰化酶基因进行诱变改良。以野游菜黄单胞菌CICC10258菌株为试验菌株，提取并克隆其乙酰化酶基因片段，然后利用稀土经PCR对其进行体外诱变，并测定诱变后乙酰化酶的基因序列及蛋白质空间构型。进而筛选得到优良菌株。本实验提取野油菜黄单胞菌(Xanthomonascampestrispv.campe

3、stris)CICC10258菌株的总基因，设计特异性的引物，在PCR中扩增乙酰化酶基因，把扩增的片段与PMD19-Tvecter重组，导入感受态细胞，进而成功筛选阳性克隆子。后期利用不同浓度的稀土离子Nd3+、La3+、Er3+对乙酰化酶基因进行PCR体外诱变，将其诱变后的乙酰化酶基因重新转化连接，导入受体细胞，并筛选出阳性克隆子。对比原始序列与诱变后的碱基序列，发现较多T碱基突变成C碱基。由此推断出稀土对乙酰化酶产生了重要影响。为后期构建表达载体，筛选优良菌株奠定了基础。关键词：黄原胶；野游菜黄单胞菌；乙酰化酶；PCR扩增；稀土诱变内蒙古

4、工业大学硕士学位论文AbstractXanthomonascampestrisisaproductionbacteriaofxanthangum.XanthangumwasfermentedbyXanthomonascampestris,ItwasakindofextracellularmicrobialPolysaccharide.Itiswidelyusedinvariousindustries.Synthesisofxanthangumisafineandcomplexprocess,Itrequirestheparticipation

5、ofavarietyofenzymesandproteinfactors,suchasthetransferoftheenzymeI-V,andpolymerase,β-amylaseketalpyruvateaminotransferase,acetyltransferase,uridinediphosphateglucosedehydrogenase,andGumAprotein.Theapplicationofgeneticengineeringtogetexcellentproductionofxanthangumstrainsisa

6、newarea.thestabilityofofxanthangumhaspositivecorrelationswiththedegreeofacetylation.ThereforeresearchingtheacetyltransferasegeneofXanthomonashasanimportantimpactontheproductionofxanthangum.Webeginthesubjectfromthepointofgeneticengineering,xanthangumproductionstrainsXanthomo

7、nascampestrishasmutagenesisimprovement.WeusetheXanthomonasextracellularbacteriaCICC10258strainsastheoriginalstrains,extractedandclonedacetyltransferasegenefragment,thenusetherareearthinvitromutagenesisbyPCR,thentakedeterminationofthemutagenesisacetyltransferasegenesequencea

8、ndspaceconfigurationofprotein.Thenfilteroutthehigh-yieldingstrains.Extractthegenom