清热解毒类中成药微生物限度检查方法验证

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1、清热解毒类中成药微生物限度检查方法验证（厦门市食品药品审评认证与不良反应监测中心361000）【摘要】目的：探讨清热解毒类中成药的抑菌效果，并对清热解毒类中成药微生物限度检查方法进行研宄。方法：根据2010年版《中国药典》对8种清热解毒类中成药微生物限度检查方法进行实验与验证。结果：所检的清热解毒中成药对金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的抑菌效果并不佳，且对菌落的抑制作用可采用不同方法予以去除，均获得70.0%以上的回收率，因此可应用在常规法的检查中。结论：建立专业的微牛.物限度检查有必要，采用冰醋酸薄膜过滤法、培养基稀释法进行清热解毒类中成药微生物限度检查。【关键词】清

2、热解毒；中成药；微生物限度检查【中图分类号】R286【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2015）36-0373-02三黄片、黄连上清片与一清软胶囊均属于中成药，可用于咽喉、牙龈肿痛，口舌生疮以及尿黄便秘等，这类清热解毒类中成药具有消炎抑菌的作用，为了对这类药品的微牛.物污染情况进行反映，需要采取一定的措施以消除抑菌作用[1]。木研究对上述清热解毒中成药进行了药微生物限度检查方法验证，对这类中成药微牛.物限度检查方法进行了探索。1.实验材料与方法1.1实验样品木研宄共纳入8种清热解毒类中成药，依次为①三黄片（生产批号：20110305,安徽华佗国药股份有限

3、公司提供）；②四季三黄片（生产批号：100910,江丙华太药业有限公司提供）;③一清颗粒（生产批号:20110403,浙江纬康药业有限公司提供）；④一清软胶囊（生产批号：110407,大连天宇奥森制药有限公司提供）；⑤黄连上清丸（生产批号：0015139,北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂提供）；⑥黄连上清片（生产批号：110328,上海海虹实业巢湖金辰药业有限公司提供）；⑦黄连上清片（生产批号：100817,上海海虹实业巢湖金辰药业有限公司提供）⑧黄连上清片（生产批号：20100971,贵州百灵企业集团制药股份有限公司）。1.2实验菌株金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白

4、色念珠菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉。艽中，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌均由中国医学菌种保藏中心提供，而黑曲霉则由中国药品生物制品检定所提供。1.3培养基和稀释液培养基均由北京三药科技开发公司提供，主要包括：胆盐乳糖培养基、瑰红钠琼脂培奍基、营养琼脂培养基、营奍肉汤培奍基以及改良马丁培养基等。自制氯化钠溶液（0.9%），氯化钠-蛋白胨缓冲液（pH=7.0）并火菌。1.4实验方法[2]（1）参照2010年版《中国药典》中关于微生物限度的检查方法进行实验。在45°C恒温下在采用20ml琼脂营养培养基器具，分别对器皿进行平行测定，在35°C下培养3天，然后

5、进行计数。（2）经24h26"C培养的第三代黑曲霉改良马丁培养基，将0.05%6ml聚山梨酯与0.9%生理盐水加入到器皿中，洗净孢子，然后吸取孢子悬浮液，使用0.5%聚山梨酯与0.9%生理盐水对悬浮液20倍稀释；吸取稀释液2ml,45°C瑰红钠琼脂培养液加入到20ml器皿中，分别对两器皿进行平行测定，于26°C培养5天后计数。（3）菌液制备完成后采用平皿法（法1）、培养基稀释法（法2，每皿0.5ml;法3，每皿0.2ml）、薄膜过滤法进行细菌（法4）、霉菌与酵母菌数量的验证，计算冋收率。菌落冋收率=实验组平均菌落数-样品组平均菌落数菌液组菌落数×100%。

6、1.结果2.1计数方法验证对细菌、霉菌与酵母菌技术方法验证，上述8种清热解毒中成药具有良好的抑菌活性，但对金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的抑菌效果并不佳，且对菌落的抑制作用可采用不同方法予以去除，均获得70.0%以上的冋收率。见表1。2.2检查方法有效性验证根据表2结果显示，清热解毒中成药对金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌并不具有活性抑制，因此可应用在常规法的检查中。3。讨论三黄片主要药效成分为大黄、黄芩、小檗碱等；黄连上清片中的主要成分包括黄芩、大荒、黄连等，四季三黄片药效成分主要为大黄、黄芩、黄柏等［3］。相关研究报告指出，黄连主要抑菌成分小檗碱，具有抑制细菌核酸合成的

7、作用，并II抑制作用在一定浓度范围内随着药物浓度的增加而增强。黄芩主要抑菌成分黄酮类衍生物抗菌谱广泛，对金黄色葡萄球菌与溶血链球菌等细菌具奋抑制作用［斗本研究采用计数法统计细菌、霉菌与酵母菌，结果发现清热解毒中成药的抑菌活性效果更明显，而对金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的抑菌效果并不佳，iL对菌落的抑制作用可采用不同方法予以去除，获得70.0%以上的冋收率。对金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别进行控制方法验证，结果发现清热解毒中成药对金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌并不具有活性抑制，因此可应用在常规法的检查中。综上所述，尽管药物的成分基本类似，但抑菌原理具冇