卵巢癌耐药铜离子转运蛋白hctr1相关mir

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1、中文摘要目的：筛选铜离子转运蛋白hCTRl相关的miRNA，探讨此类miRNA是否通过铜离子转运蛋白hCTRl参与卵巢癌顺铂耐药。方法：通过生物信息学数据库及已发表的文献，初步筛选与hCTRl及卵巢癌铂类耐药相关的miRNAs;RealTime-PCR和WesternBlot在卵巢癌及其耐药细胞株中验证初步筛选miRNA与hCTRl表达的相关性；上调或下调初步筛选的miRNA，免疫荧光定位，流式细胞术定量分析miRNA对hCTRl表达的调控作用；通过双荧光素酶报告基因验证hCTRl的3’UTR中是否包含

2、筛选miRNA的直接作用位点；电感耦合等离子质谱法（ICP-MS)测定miRNA表达与细胞内铂含量的相关性。结果：通过检索发现，miR-206可能与卵巢癌耐药可能相关，同时也与hCTRl的3'UTR中两处序列互补；miR-206在卵巢癌细胞中与hCTRl基因及蛋白表达呈负相关；与其他初步筛选的miRNA相比，miR-206对hCTRl表达的调控最为明显；A2780卵巢癌细胞中转染miR-206拟似物及抑制物发现，miR-206表达水平影响hCTRl基因及其蛋白的表达；通过双荧光素酶报告基因实验发现，mi

3、R-206能够特异性结合hCTRl3'UTR的种子区域，降低mRNA的表达，最终下调hCTRl蛋白表达；同时ICP-MS对细胞内铂含量的测定表明，上调miR-206能够减少A2780细胞对顺铂的摄入。结论：miR-206可以调节hCTRl基因及蛋白的表达，并降低卵巢癌细胞株对顺铂的摄入能力，推测miR-206通过hCTRl参与卵巢癌铂类耐药。关键词：miRNA；hCTRl；卵巢癌；顺铂；耐药中图分类号：R71复旦大学硕士毕业论文AbstractObjective：ToscreenthehCTRlrela

4、tedmiRNA;andconfirmwhethermiRNAisinvolvedincisplatinresistanceofovariancancerthroughhCTRl.Methods：miRNAs,associatedwithhCTRlanddrugresistance,wereselectedfirstlybysearchingbio-databasesandpublishedarticles.Then，miRNAsandhCTRlwereconfirmedinovariancancerc

5、elllinesandthepairedcisplatinresistancecellsbyReal?timePCRandWesternBlot.RegulatoryfunctionoftargetmiRNAtohCTRlexpressionwasinvestigatedusingtansfectionofmiRNAmimicsorinhibitor.LuciferaseassaywasusedtoidentifyifthefunctionofmiRNAisactivatingthroughmatchi

6、ngthe3'UTRseedregion.Finally,measurementofconcentrationofcisplatinincellswasdonebyICP-MSassay.Results：miR-206wasoneofthemostpotentialmiRNAsofthethreemiRNAsscreenedinitially,whichcouldsuppresstheexpressionofhCTRl，andcouldmatchthespecificsequenceof3'UTRofh

7、CTRl.ThisstudyindicatedthattheexpressionofmiR-206wasrelatedwiththelowexpressionofhCTRlinbothmRNAandproteinlevel.TransfectionofmimicsandinhibitordocumentedthathCTRlmaybeinvolvedinregulationofhCTRlexpression.Moreover,miR-206couldmatchseedregioninthe3'UTRof

8、hCTRlmRNAtodecreasethetranscriptionofmRNAbyluciferaseassay.ICP-MSshowedthatmiR-206alsoeffectedtheaccumulationofcisplatininovariancancercells.Conclusion：miR-206coulddownregulatetheexpressionofhCTRlthroughmatchingthespecific