小立碗藓铜离子转运体蛋白基因的克隆及其表达分析.pdf

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1、万方数据r111’‘1●lnegenecloningandeXDress]onl‘n·‘analysisolcoppertransporterproteininPhyscomitrellapatensrn‘●‘1heslssubmlttedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceSongQing(DepartmentofLifeScience)Supervisor：prof．YiYanjnnQingdao．ChinaJune，2012万方

2、数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外j论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：Jol2,年多月与9El关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以

3、用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：二012年占月名口日导师签名：完d锄秀时间：少f>年／月名秒日万方数据青岛农业大学摘要小立碗藓铜离子转运体蛋白基因的克隆及其表达分析摘要本研究以小立碗藓为材料，克隆了铜离子转运蛋白基因及启动子，获得转基因拟南芥，并进行了亚细胞定位观察，探讨了铜离子转运蛋白基因对铜离子胁迫的响应，为研究小立碗藓铜转运蛋白基因的功能以及苔藓植物忍耐、富集重金属机制、利用苔藓植物净化环境中重金属污染、培育抗金属污染植物新种质奠定基础。主要研究结果如下：1．扩增出两个小立碗藓铜转运蛋白

4、基因PpCTRl，PpCT勉，分别连到pMDl8-T载体上进行测序比对。2．采用Gateway克隆技术构建了PpCTRl．PpCTR2基因的GFP融合表达载体。3．转有pEarleyGatel03-PpCTR质粒的农杆菌GV3101侵染洋葱内表皮细胞，经16h共培养后在荧光显微镜下观察，图像结果显示PpCTRl和PpCTR2蛋白可能存在于细胞膜和细胞核中。4．将pEarleyGate103-PpCTR质粒转化农杆菌GV3101。利用花浸法侵染野生型拟南芥，获得pEarleyGate103．PpCTRl／2转基因株系。5．运周半定量RT-PCR方法检测小立碗藓铜转运蛋白基因在

5、不同外源铜离子处理下的表达情况，为验证PpCTm、PpCn毪的功能奠定了基础。6．扩增出两个小立碗藓铜转运蛋白基因?pCTRl．PpCT勉启动子，分别连到pMDl8．T载体上进行测序比对。7．采用Gateway克隆技术构建了小立碗藓铜转运蛋白基因PpCTRl．PpCT勉启动子的GUS融合表达载体，构建了PpCTRl和PpCTR2启动子驱动的GUS基因植物表达载体。8．将pKGWFS7．0-PpCTRI／2p质粒转化农杆菌GV3101。利用花浸法侵染野生型拟南芥，获得pKGWFS7．0-PpCTRl／2p转基因株系。9．对小立碗藓进行不同浓度的Cu处理，研究Cu在小立碗藓细胞

6、中的分布，结果表明小立碗藓细胞内和细胞外的Cu随着处理浓度的升高而升高。关键词：小立碗藓；PpCTRl；PpCTR2；铜离子转运蛋白万方数据青岛农业大学AbstractThe‘genecloningandexpressionanalysisofcoppertransporterproteininPhyscomitrellapatensAbstractInthisstudy,thematerialPhyscomitrellapatenswasused．ThecoppertransporterproteinpromoterandgeneWasamplified．Thetrans

7、genicArabidopsishasobtainedandthesubeellularlocalizationhasobserved．Ishasgreatsignificancetoinvestigatethecoppertransportergeneinresponsetothecopperions．Thisstudyprovidesimportantfoundationforinvestigationofaccumulationofheavymetalsandthestudyofbryophytespurif