ipe1通过调控emt抑制胃癌的侵袭和转移-药理学专业毕业论文

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1、CoNTENTSChilleseAbstract1EnglishAbstract．4Abbreviations．．8Text．．10Introduction．．10Materials一14Methods21Results．．36Discussions．52Conclusions55Ref．erences．．56Acknowledgemem～63Publications．．64万方数据山东大学硕士学位论文TIPEl通过调控EMT抑制胃癌的侵袭和转移硕士研究生：刘文文专业：药理学指导教师：张艳副教授中文摘

2、要目的：胃癌(gastriccarcinoma，GC)在全世界范围内都有着较高的发病率和致死率。我国的胃癌发病率已经跃居世界首位，占全世界胃癌发病率的42％。由于胃癌具有“发病率高、转移率高、病死率高”、“早期诊断率低、手术根治率低和5年生存率低”的“三高、三低”的特点，所以探索关键的胃癌标志物以实现胃癌的早期临床诊断，从而进一步发现胃癌治疗的潜在靶点用于胃癌的治疗，是胃癌研究领域近些年最大的热点也是设计本课题的临床意义所在。胃癌最大的特点是早期易发生组织和腹腔的转移，也是影响胃癌预后的主要因素，因此

3、研究胃癌转移的机制，找到关键的靶基因是胃癌研究中迫切需要解决的问题。本课题主要研究的基因TIPEl(tumornecrosisfactor旺．inducedprotein8．1ike1，TNFAJP8L1)是TNFAIP8(tumornecrosisfactor0【．inducedproteill8，肿瘤坏死因子0【．诱导蛋白8)家族中的一员，该家族目前为止发现了TIPEl、TIPE2、TIPE3和TNFmP8四个成员，这四个成员高度同源且其中TIPEl和TIPE2的同源性达到了86％。研究表明TNF

4、mP8家族与细胞凋亡、细胞间的信号转导以及肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移密切相关，其中TIPE2是在2008年发现的免疫负调控因子，也是目前该家族中研究最热的分子。已经有充分的证据表明TIPE2能够显著抑制由Ras介导的肿瘤发生和侵袭转移，基于TIPEl和TIPE2的高度同源性，我们推测TIPEl在肿瘤的发生发展中的也发挥了重要的作用。本课题拟通过临床胃癌标本、胃癌细胞系和裸鼠转移模型三个方面对TIPEl在胃癌侵袭和转移中发挥的作用及机制进行深入的探究，完善胃癌发生转移的机制，用于胃癌的临床诊断和治疗。万

5、方数据山东大学硕士学位论文方法：1．检测临床胃癌标本中TIPEl的表达变化1．1收集100例胃癌和癌旁组织，通过实时定量RT-PCR和免疫组化(IHC)的方法检测TIPEl在胃癌组织中的表达变化情况。1．2查阅100例临床胃癌患者的病理资料，统计分析TIPEl表达与临床资料如病理分期以及组织和淋巴转移情况间的相关性。2．探究TIPEl在胃癌发生发展中的作用及机制2．1本实验选用SGc7901、BGc823、AGs三种常见胃癌细胞系作为研究对象。构建稳定过表达TIPEl的慢病毒和基因沉默TIPEl的RN

6、Ai用于转染细胞。2．2体外实验：通过划痕、TraJlswell模拟胃癌侵袭转移模型，观察过表达TIPEl以后胃癌细胞侵袭和迁移能力的变化。2．3体内实验：选取5．6周龄的雄性裸鼠随机分为实验组和对照组，尾静脉注射稳定过表达TIPEl的胃癌细胞系SGC7901、BGC823建立体内转移模型。一个半月后取材，通过苦味酸染色、HE染色观察过表达TIPEl对胃癌细胞体内转移的影响。2．4通过实时定量R■PCR、Westemblot以及免疫荧光的方法检测过表达TIPEl或沉默TIPEl后EMT相关蛋白E．ca

7、dheriIl、Villlentill、Slug、Snail、T、)vist以及MMP2、MMP9和B．catellin的表达变化情况。结果：1．相比于癌旁组织TIPEl在胃癌组织中的表达显著降低mRNA(实时定量RT-PCR)和蛋白检测结果(IHC)显示，相对于正常癌旁组织，胃癌组织中的TIPEl表达量显著降低，并且这种降低趋势与胃癌的分化程度、局域淋巴结的转移情况密切相关，即随着胃癌分化程度的降低，TIPEl的表达也随之进一步降低，在发生远处转移时TIPEl的表达最低。2．过表达TlPEl能够显著

8、抑制胃癌细胞的转移和侵袭2．1用稳定过表达TIPEl的细胞系SGC7901和BGC823进行划痕实验，观察0h，6h，12h和24h迁移距离，统计结果显示从6h开始过表达TIPEl组的迁移距离就显著小于对照组。体外TraJlsWell和侵袭实验结果与划痕实验结果一致，表明过表达TIPEl体外能够显著抑制胃癌细胞系SGC7901和BGC823的迁移和万方数据山东大学硕士学位论文侵袭。2．2裸鼠转移模型取材进行苦味酸和HE染色发现尾静脉注射的胃癌细胞系主要转