探讨klf4在鼻咽癌增殖、emt和侵袭转移中的调控作用

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文探讨Klf4在鼻咽癌增殖、EMT和侵袭转移中的调控作用ToexploretherolesofKlf4inproliferation，EMT，invasionandmetastasisofnasopharyngealcarcinoma课题来源：国家自然科学基金委员会．广东省联合基金重点项目(u0732006)国家科技部973项目(2010CB529400)国家自然科学基金(81172587)学位申请人赵尊兰导师姓名姚开泰教授肖东研究员专业名称肿瘤学培养类型学术型培养层次硕士研究生所在学院基础医学院2013年5月19日广州J嬲嬲煳硕士

2、学位论文～～～探讨Klf4在鼻咽癌增殖、EMT和侵袭转移中的调控作用硕士研究生：赵尊兰硕士生导师：姚开泰教授指导老师：肖东研究员摘要鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)是我国南方和东南亚常见的恶性肿瘤之一，是指发生在鼻咽粘膜的恶性肿瘤。其发病与环境、饮食、遗传以及EBV(EpsteinBan"Virus)感染等因素有关，发病年龄大多为中年人，流行病学研究发现，鼻咽癌发病有地域、民族和家族聚集现象。目前NPC的治疗方法有放疗和化疗，以放射治疗为主，早期治愈率较高，但因其恶性程度高，早期既有淋巴结转移，因此就诊时往往已达中晚期，此时其治愈率

3、却不理想。而且目前，对于NPC的具体发病机制还不是十分清楚，因此对于进一步了解NPC的发生发展以及与之相关的治疗手段值得我们深入研究。Klf4(Krfippel．1ikefactor4)属于Klf家族，为一种真核生物中具有锌指样结构的蛋白转录因子。Klf4首先由ShieldsJM等于1996年被描述，他们从小鼠的NIH3T3细胞cDNA文库中分离得到该基因，因其主要在消化道表达，故又被称之为胃肠富集Klf(gut-enrichedKrfippel—likefactor，GKII')。Klf4蛋白含有多个功能区域，包括N末端的富含酸性氨基酸的转录激活区，能够参与蛋白

4、．蛋白之间的相互作用；以及C．端能与DNA结合区域结合的锌指结构区域(易与CACCC序列元件和(或)富含GC序列的靶基因调节序列结合)，另外还有临近N．端锌指结构区域的转录抑制区。Klf4主要在皮肤、口腔、胃肠道上皮、血管内皮等处表达丰摘要富。Klf4在体内多个方面发挥着重要的作用，参与正常组织细胞的增殖、分化以及凋亡等多种生物学行为，并能够维持干细胞的自我更新。Klf4通过与不同的靶基因结合，可以激活或抑制转录。在结肠上皮中，Klf4可以通过抑制细胞增殖和促进其分化来维持结肠上皮的体内平衡，另外，Klf4还是皮肤上皮分化的一个重要分子；研究发现，在血管损伤后，K

5、lf4可以在平滑肌细胞中迅速表达上调。除此之外，在肿瘤组织中，Ⅺf4可以通过与不同靶基因的作用，发挥癌基因或抑癌基因的作用，从而多角度的参与肿瘤的发生发展。在结肠癌中，因Klf4的甲基化和杂合性的丢失，证明Klf4在结肠癌为低表达，并且Klf4通过与APC基因结合来抑制Wm通路从而进一步抑制结肠癌的发生；另外，更多的证据表明，Klf4同样可以抑制胃癌的发生。研究发现，Klf4在食管癌、膀胱癌和肺癌的组织中均表达降低，起抑癌基因的作用，而在乳腺癌组织中，其表达升高，发挥癌基因的作用。研究证实，Klf4表达升高为喉鳞癌的一个早期事件。研究表明，无论Klf4作为癌基因或

6、抑癌基因，可能与不同的细胞环境、其他基因的表达模式和单个细胞染色质环境有关。迄今，Klf4在NPC发病中所发挥的作用尚不清楚，那么其在NPC中的表达情况是怎样的，又是如何参与NPC的发生发展呢?这些都值得我们进一步探讨。鉴于Klf4目前的研究现状，我们检测了NPC细胞及组织中Klf4的表达谱，基于携带Klf4的慢病毒载体建立稳定过表达Klf4的NPC细胞株，并通过检测NPC细胞株的生物学行为及EMT相关基因的变化，来阐明Klf4在NPC发生发展中所发挥的功能，同时我们还合成了下调Klf4表达的siRNA，反面验证Ⅺf4在NPC中的作用。为此我们进行了如下研究。方法

7、：第一章NPC细胞株和组织标本中Klf4的表达谱1．通过qRT．PCR检测CNEl、CNE2、C666—1、HNEl、5—8F、6—10B、SUNEl和HONEl8种NPC细胞株中Klf4表达谱(以NP69作为对照)。II硕士学位论文2．收集NPC组织标本21例和慢性鼻咽炎症组织标本6例，应用qRT．PCR检测Klf4的表达谱，结果分析运用2越△C‘方法进行比较。第二章Klf4对NPC细胞增殖的影响I．建立稳定过表达Klf4的NPC细胞株利用慢病毒表达载体pLenti．Klf4生产携带Klf4的慢病毒，收集病毒上清分别感染NPC细胞株5．8F、HONEl和SUNE

8、l，48．