应用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌结果分析

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1、应用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌结果分魏峰（南阳市第二人民医院检验科河南南阳473012）【摘要】I；的：分析头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的结果，评价其临床价值。方法：对分离所得的218株葡萄球菌进行mecA基因的检测，对比头孢西丁纸片扩散法与苯唑西林纸片扩散法的应用效果。结果：苯唑西林纸片扩散法结果与mecA结果符合率为96.3%,而头孢西丁纸片扩散法结果为99.43%。在CNS的检测结果上，头孢西丁在特异性与敏感性（100%、94.6%）上均高于苯唑西林（95.9%、88.2%）,具有统计学意

2、义（P<0.05）o结论：头孢西丁纸片扩散法对耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度较高，检测结果与PCR检测结果相关性高，丑操作简便，可在临床应用上推广。【关键词】头孢西丁；耐甲氧西林葡萄球菌；mecA基因；苯唑西林【屮图分类号】R37【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）15-0150-02MRS是重要感染病原菌，其耐药性的产生主要是与mecA基因的控制编码产生的PBP2a（青霉素结合蛋G）有关，从而导致出现青霉素的耐药性，主要有效的抗生素为万古霉素［1］。但因MRS的基因突变使万古霉素对其敏感性人幅度降低，

3、因此，临床应用上如何快速有效的检测出MRSA是治疗过程屮的关键。本文以mecA基因检测法结果为标准，比较苯唑西林纸片扩散法与尖孢西丁纸片扩散法对MRS的检测结果，取得了较为满意的结果，现具体报告如下。1.资料与方法1.1一般方法218株耐甲氧西林葡萄球菌均由我院自2014年10月份至2015年9月份于就诊人群屮采集，标本來源如卜：142株为痰液、38株为分泌物、15株为分泌物、14株为脓液、9株为咽拭子。经APISTAPH系统鉴定，葡萄球菌的分类如下：78株为金黄色葡萄球菌、47株为溶血葡萄球菌、52株为表皮葡萄球菌、1

4、1株为腐生葡萄球菌、7株为模仿葡萄球菌、8株为里昂葡萄球菌、5株为松鼠葡萄球菌、5株为赛氏葡萄球菌、2株为人葡萄球菌、3株为缓慢葡萄球菌。金黄色葡萄球菌ATCC29213与ATCC25923为质控菌株。1.2试剂与仪器离心机、零下80°C冰箱、PCR扩增仪、由英国OXOID生产的苯唑西林纸片（规格为每片lμg）、头孢西丁纸片（规格为每片30μg）、由杭州天和微生物试剂公司生产的水解酪蛋白（M-H）琼脂、生物梅里埃公司生产的金黄色葡萄球菌乳胶凝集试剂、PCR引物序列为5′-GGTTACGGACAAG

5、GTGAAATACTGA-3′、5′-AGTTCTGCAGTACCGGATTTGC-3′,扩增吋mecA作为靶基因，最终所得片段为533bp。1.3方法1.3.1PCR检测mecA基因首先提取模板，再将DNA提取液加入PCR反应体系中，在93°C下预变性，时长为2分钟，在93°C（60s）、55°C（60s）、72°C（60s）的循环条件下循环35次，结束后在72°C下延伸2分钟。对照吋，以金黄色葡萄球菌ATCC29213为准，出现相对分子质量为533bp的阳性模板吋视为阳性。1.3.

6、2纸片扩散法以美国临床实验室标准化协会（NCCLS）制定的相关标准为准，在生理盐水中置入18〜24h的单个纯菌落，制成菌悬液，并涂在M-H培养基的表面上，贴上lμg的苯唑西林与30μg的头孢西丁的纸片，在35°C条件下培养24小吋。1.4评定标准金黄色葡萄球菌的结果评定：苯唑西林与头孢西丁的抑菌圈分别为①耐药：直径≤10mm与≤19mm;②敏感：直径≥13mm与≥20mm。凝固酶阴性葡萄球菌的结果评定：苯唑西林与头孢西丁的抑菌圈分别为①耐药：直径≤17mm与≤24mm;②敏

7、感：直径≥18mm与≥25mm。1.5统计学方法本次研究全部数据均采用SPSS17.0统计学软件进行统计分析，计量资料采用t检验用（x-±s）表示；计数资料采用χ2检验用（％）表示，以P<0.05为界限，作为是否具有统计学差异的标准。1.结果2.1三种方法结果PCR检测mecA结果：测定218株菌株，共58株MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌），119株MRCNS（耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌），检出的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的阳性例数为177株（81.2%）；苯唑西林纸片扩散法结果

8、:测定218株菌株，共58株MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌），116株MRCNS（耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌），检出的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的阳性例数为174株（79.8%）,与mecA结果有11例不符合，符合率为96.3%；头孢西丁纸片扩散法结果：测定218株菌株，共58株MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄