仪器与纸片扩散检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法比较评价

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1、仪器与纸片扩散检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法比较评价〔摘要〕目的：比较分析耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)仪器检测与纸片扩散检测的检出率。方法：采用KB纸片扩散法，全自动微生物分析仪法，并以琼脂稀释法为标准对临床分离的63株葡萄球菌进行检测，比较3种方法的检出率。结果：对63株葡萄球菌(凝固酶阳性50株，凝固酶阴性13株)3种方法检出率分别为60.3%、57.1%、50.8%。含4%氯化钠(NaCl)MH平板药敏纸片扩散法和VITEK32型自动微生物鉴定系统法差异无显著性(P＞0.05)，与琼脂稀释法差异无显著

2、性(P>0.05)，而仪器法与琼脂稀释法差异无显著性(P＞0.05)。结论：KB纸片扩散法,仪器法和作为MRS检测推荐方法的含盐琼脂平板稀释法对MRS的检出率,三者差异均无显著性，仪器法与KB纸片扩散法均可用于临床常规实验室MRS的检测。　　〔关键词〕耐甲氧西林葡萄球菌；纸片扩散法；仪器法；琼脂稀释法　　耐甲氧西林葡萄球菌(MethicillinresistantStaphylococcus，MRS)所致院内感染已成为全球范围内一个越来越严重的问题〔1〕，有效预防和控制其感染的关键是及时准确地检出MR

3、S，为临床合理选择抗生素提供依据〔2〕，因而快捷、准确的检测方法对快速采取有效的感染控制措施和MRS感染流行病学调查十分重要。MRS的检测方法有苯唑西林纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂扩散法、Etest法、仪器法及PCR技术检测mecA基因等〔3〕，我们将临床分离的63株葡萄球菌用含4%氯化钠(NaCl)MH平板苯唑西林纸片扩散法和VITEK32型自动微生物鉴定仪法进行检测比较，并以含6　μg/ml苯唑西林的琼脂稀释法为标准，评价其准确性。　　1材料与方法　　1.1　材料　　1.1.1　菌株及其来源　自20

4、06年1月至2006年5月从江医二附院临床患者的痰、血、尿、脓液、前列腺液及阴道分泌物等标本，经常规分离得到63株葡萄球菌，包括凝固酶阳性葡萄球菌50株，凝固酶阴性葡萄球菌(S)13株。另MRS阳性参考菌株ATCC(R)43300，MRS阴性金黄色葡萄球菌ATCC25923，购自卫生部临检中心。　　1.1.2　苯唑西林纸片　购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司，SDS琼脂糖、溴化乙锭、溶菌酶、蛋白酶K为美国Sigma产品，丙烯酰胺、双丙烯酰胺TEMED和TBE为美国Gibcob

5、rl公司产品。　　1.1.3　仪器　法国生物梅里埃公司生产的VITEK32型鉴定系统及配套的GPSSV葡萄球菌药敏检测卡。　　1.2　方法　　1.2.1　含4%NaClMH平板纸片扩散法　由于苯唑西林较甲氧西林稳定、不易失活，通常用苯唑西林代替甲氧西林测定葡萄球菌。配制0.5麦氏单位菌液接种于含4%NaCl的MH平板，贴1μg/片苯唑西林药敏纸片，35℃、24h观察结果(S孵育48h)金黄色葡萄球菌(SA)抑菌圈≥13mm为敏感，11mm～12mm为中介，≤10mm为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌≥18mm

6、为敏感，≤17mm为耐药。　　1.2.2　琼脂稀释法　NCCLS推荐为测定耐甲氧西林葡萄球菌的参考方法，在含4%NaCl、6μg/ml苯唑西林MH平板中点种0.5麦氏单位菌液，经35℃、24h孵育检查琼脂表面有无细菌生长，只要有一个菌落生长即判为MRS。　　1.2.3　仪器检测　挑取待检菌落，严格参照GPSSV卡说明书配制一定浓度菌悬液，置备GPSSV药敏卡上机，用VITEK32型全自动微生物鉴定仪检测结果。　　1.2.4　质量控制　以金黄色葡萄球菌ATCC(R)43300为MRS阳性参考菌株，金黄色

7、葡萄球菌ATCC25923为MRS阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。　　2　结果　　3种方法对MRS的检出率见表1。　　表1　3种方法对MRS的检出率（略）　　对3种方法MRS检出率进行χ2检验，含4%NaClMH平板药敏纸片扩散法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异无显著性(χ2=1.16，P>0.05),VITEK32型仪器检测法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异也无显著性(χ2=0.51，P＞0.05),同时纸片扩散法MRS检出率与VITEK32型仪器检测法MRS检

8、出率差异也无显著性(χ2=0.13，P＞0.05)。　　3　讨论　　目前国内外虽然用以检测MRS的方法很多，由于MRS本身对甲氧西林耐药存在有不均一性，且甲氧西林不稳定，故常用苯唑西林代替甲氧西林来检测MRS。由于纸片扩散法操作简便、价格低廉，不需要特殊仪器设备，可以和普通药敏实验同时进行，在多种MRS检测方法中，目前很多医院临床常规微生物实验室仍在采用这种方法，从我们的实验结果看，纸片扩散法与被N