熊果酸对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

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1、熊果酸对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研陈鹏丁志杰邯郸市屮心医院056001摘要目的：探讨熊果酸（UA）对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护用及其作用机制。方法：采用四动脉结扎法制备全脑缺血再灌注大鼠模型，选取80只模型大鼠随机分为模型对照组、熊果酸（40、80和120mg/kg）治疗组，并另取20只同龄大鼠做为假手术组；各组大鼠均于插入栓线后立即通过尾静脉注射给药。结果：与模型对照组相比，熊果酸（80>120mg/kg）能够改善全脑缺血再灌注大鼠学习能力、促进翻正反射和脑电的恢复、降低脑组织含水量、

2、抑制脑组织病理形态学改变；熊果酸（80、120mg/kg）能够改善脑组织屮SOD、CAT活性，降低LDH、MDA含量,降低TNF•α、IL・6含量，其中120mg/kg治疗组IL-lβ含量显著降低，差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）o结论：熊果酸对大鼠全脑缺血再灌注损伤具有剂量依赖性的保护作用，其作用机制可能熊果酸能够有效改善抗氧化酶系统活性、减轻自由基损伤，抑制炎症反应有关。关键词熊果酸；全脑缺血再灌注；保护作用；机制屮图分类号：R96文献标识码：A1材

3、料与方法1.1试验药物与试剂熊果酸购自陕西慧科植物开发有限公司（批号:120417,纯度≥98%）；LDH、MDA、SOD、CAT试剂盒购自南京建成生物工程研究所；氯化■乙3,5■三苯基四氮卩坐（TTC）购自屮国医药集团上海化学试剂公司；TNF-α>IL-l&betahIL-6EILSA检测试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司；其余试剂均为分析纯。SCXK（冀）2008-1-003,动物批次号：1307008o1.3主要仪器全自动生化分析仪（武汉精诚伟业医疗设备有限公司）；UV-1200

4、紫外■可见光分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；BL-420E生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；Morris水迷宫（中国医学科学院药物研究所）；IKAT10高速组织匀浆机（广州仪科实验室技术有限公司）；石蜡切片机（德国SLEE公司）。1.4方法1.4.1模型的制备与分组选取80只大鼠模型随机分为模型对照组和熊果酸（40、80和120mg/kg）治疗组，每组20只；另取20只同龄正常人鼠作为假手术组，假手术组行手术通路，但不做缺血处理。熊果酸各治疗大鼠均于插入栓线后立即通过尾静脉注射给药，模型对照

5、组和假手术组分别给予等体积的生理盐水。1.4.2行为学研究再灌注6h后，通过Morris水迷宫试验测定各组大鼠学习记忆能力，于水温（21±2）°C中，首先进行训练，分别从4个不同位置放入水迷宫，若大鼠在180s内未找到平台，将其引至平台并停留10s,则寻台潜伏期记为180s；然后进行测试，任意选定位置，以寻台潜伏期作为人鼠空间记忆成绩，测定三次，取平均值。1.4.3翻正反射和脑电恢复吋间再灌注后，观察翻正反射恢复吋间，并通过BL-420E生物机能实验系统测定各组人鼠脑电图振幅，观察脑电恢复吋

6、间。144脑组织含水量的测定再灌注6h后，断头取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，称定大脑湿重量，然后置于110°C恒温干燥箱中烘烤48h后称定干重量。计算公式：脑含水量二［（湿垂量■干重量）/湿重量］×100%1.4.5脑组织形态学变化的观察再灌注6h后，参照1.4.4方法取脑组织，置于4%多聚甲醛溶液中进行固定、石蜡包埋、切片，然后行常规HE染色，通过光学显微镜观察脑组织形态学变化。1.4.6脑组织中LDH、MDA含量和SOD、CAT活性的测定再灌注6h后，参照1.4.4方法取脑组织，剪碎后进

7、行研磨匀浆，经3000rpm离心lOmin后，取上清液，按试剂盒操作步骤，通过生化检测仪测定血清中LDH含量，通过紫外■可见分光光度计测定血清中MDA的含量和SOD、CAT活性。147脑组织中TNF・α、IL-lβ>IL・6含量的测定取1.4.6所制备的脑组织匀浆液，按ELISA试剂盒操作步骤测定脑组织中TNF・α、IL-lβ.IL-6含量。1.4.8统计学方法实验数据均以形式表示；运用SPSS13.0进行统计分析，采用单因素方差分析进行检验；P<0.05

8、表示差异有统计学意义，P<O.Ol表示有极显著性差异。2结果2.1各组犬鼠学习记忆能力的变化较假手术组，模型对照组大鼠寻台潜伏期显著升高；而经熊果酸(80、120mg/kg)治疗后，全脑缺血再灌注损伤大鼠寻台潜伏期显著缩短，且120mg/kg治疗组优于80mg/kg治疗组，差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),提示熊果酸对全脑缺血再灌注人鼠学习记忆功能具有剂量依赖性的改善作用，结果见表2.2各组