芝麻油对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

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1、芝麻油对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制　　【摘要】目的：探�芝麻油对大脑缺血再灌注损伤的保护作用及其作用的机制。方法：实验将雄性SD大鼠20只随机分为两组，对照组（C组，n=10），行大脑中动脉阻断前5d及术前1h予生理盐水4mL/（kg・d）灌胃；芝麻油组（S组，n=10）于中动脉阻断前5d及术前1h给予芝麻油4mL/（kg・d）灌胃。脑缺血90min后恢复血流，于大脑中动脉阻断后24h处死大鼠，测各组脑组织中核转录因子（NuclearfactorkappaB，NF-κB）P65表达阳性率（%）、丙二醛（malonalde

2、hyde，MDA）和超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）的水平；同时检测C组和S组的脑水肿指数、脑梗死的体积、神经功能评分。结果：脑梗死S组大鼠神经行为学评分明显低于C组，S组大鼠缺血侧的大脑水肿指数、脑梗死体积较C组明显改善（P　　doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.02.00710缺血性脑卒中是老年人常见的脑血管病，脑卒中后致残率高达78.4%，脑缺血后生成大量的自由基，并使膜脂质过氧化使细胞膜的结构破坏和钠泵功能障碍的结果，导致脑细胞膜及血脑屏障损害、脑组织水肿，大量

3、自由基的生成是脑缺血损伤的重要因素[1]。从可行性和安全性考虑，目前正有很多研究去发现食物中的神经保护物质[2-3]，芝麻油与其他食用油相比具有独特的很强的抗氧化能力和抑制炎症反应性质[4]，故笔者设想采用芝麻油预处理能否减轻脑组氧化应激反应、抑制炎症因子合成及释放，因而对局灶性脑缺血再灌注造成的脑损伤具有保护作用，并其作用机制进行探讨。现报道如下1材料与方法1.1材料健康雄性SD大鼠，体质量250～300g（大连大学动物实验中心）；焙煎的芝麻油（李锦记食品有限公司）；兔抗大鼠核转录因子-κB/p65抗体活性测试盒（提供商为美国Pr

4、oteintech公司）、MDA测试盒、SOD测试盒（南京凯基生物工程有限公司）；氯化-2，3，4一三苯基四氮唑染色试剂（美国Sigma公司提供）1.2实验分组健康雄陛SD大鼠20只，随机分为两组：（1）对照组（C组）10只，术前连续5d及术前1h予胃管注射生理盐水，而后行大脑中动脉阻断术；（2）芝麻油预处理组（S组）10只。大脑中动脉阻断术前连续5d及术前1h予芝麻油4mL/kg灌胃。两组均予以同样普通颗粒饲料饲养1.3模型的制备以戊巴比妥钠（4510mg/kg）腹腔内注射麻醉，实验参照Zea-Longa线栓法来进行制备大鼠大脑短

5、暂性局灶的脑缺血再灌注动物模型，脑梗死对照组和芝麻油预处理组均采用线栓阻塞大脑中动脉2h，模拟大鼠发生急性脑梗死。所以实验大鼠在手术中均采用白炽灯加热，以保持体温恒定，肛温37℃左右。大鼠苏醒后出现血管栓塞的同侧Horner征，以及对侧肢体运动障碍即表明为模型成功，相反表明造模失败，予以剔除。实验大鼠在造模成功缺血90min后进行再灌注，24h后处死动物取相关实验标本1.4实验动物处理造模成功的大鼠缺血再灌24h时对C组与S组大鼠行神经功能评分，评分后处死，分别从两个实验组中分别随机取5只大鼠，麻醉后予以断头并取出取脑，去除低位脑干

6、，去除嗅球和小脑，将大鼠脑组织自前向后连续切成约2mm厚的冠状切片，共5片。切片后置于2%氯化-2，3，4一三苯基四氮唑磷酸盐缓冲液中，于37℃避光染色30min以后，再置4%多聚甲醛溶液中固定标本并进行摄片。标本无病变部分被染成鲜亮的红色，梗死区呈现出白色1.5大鼠神经功能缺损评分模型制作参照Longa等[5]大脑中动脉栓塞制造模型法对再灌注2410h后的大鼠进行4分5级的神经功能缺损评分。具体评分标准如下：0分：未观察到大鼠的神经功能缺损表现；1分：大鼠手术对侧前腿不能完全伸直；2分：大鼠爬行路径中向手术对侧转圈；3分：爬行过程

7、中向手术对侧歪倒；4分：未观察到大鼠有自发行走，伴或不伴意识障碍；5分：大鼠发生死亡。其中评分不足1分者或大于3分者均被剔除，并随即补充；得分1～3分且未出现蛛网膜下腔出血者为造模成功1.6大鼠脑梗死检测方法造模成功的大鼠缺血再灌24h后即刻从两个实验组中分别随机取5只大鼠，试验用鼠麻醉后快速断头后取出新鲜脑组织，将组织放入冰柜中冻10min（-20℃），去掉嗅球、低位脑干和小脑，按顺着冠状方向将大脑从前至后的顺序切成厚片（约2mm厚），约5片，加入到浓度为2%TTC染色试剂中，在37℃避光恒温箱里孵育并染色约20min，使用4%多

8、聚甲醛溶液将其固定，并在满24h后拍照。正常无病变的部分被染成鲜亮的红色，梗死区呈现出白色。应用Photoshop图像分析软件得到各个脑片梗死面积，用来计算梗死体积。大鼠脑梗死体积算法：测量每一脑片的梗死面积，乘以每片脑片厚度（约2m