医学毕业论文脂质体转染反义脱氧寡核苷酸对k562细胞α珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响

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1、脂质体转染反义脱氧寡核苷酸败五^1＞胞a珠蛋白基因表适及细胞增殖的影响姓名：2014年6月25日脂质体转染反义脱氧寡核苷酸对K562细胞a珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响【摘耍】本研究查明脂质体转染反义脱氧寡核苷酸(ASON)对K562细胞a珠蛋G基因表达的抑制作用及对细胞增殖的影响，探讨基因调控治疗(3地中海贫血的新思路。设计合成靶Aa珠蛋白基凶的ASON，并与正义寡核苷酸(SON)和空白对照进行比较。采用脂质体转染技术将ASON、SON与K562细胞共同培养，用荧光敁微术、流式细胞术检测脂质体转染效率，用实时荧光定量RT

2、PCR法检测K562细胞中a珠蛋白基因表达情况，并通过CellCountingKit8(CCK8)法观察脂质体转染ASON技术对细胞增殖的影响。结果表明：脂质体转染效率在ASON作用24h达到最高，脂质体转染ASON组的a珠蛋白基凶表达水平显著低于SON和空白对照组(pO.Ol),并对细胞的增殖有明显的抑制作用，上述效应呈浓度依赖性。结论：脂质体转染ASON能特异性的抑制K562细胞屮ct珠蛋白基因表达，可能会成为p地中海贫血基因治疗的一个新靶点。【关键词】脂质体转染EffectofLiposomalTransfectio

3、nofAntisenseOligodcoxynuclcotidconAlphaglobinGeneExpressionandProliferationofK562CellsAbstractTheobjectiveofstudywastoinvestigatetheeffectofliposomaltransfectionofantisenseoligodeoxynucleotide(ASON)onalphaglobingeneexpressionandproliferationofK562cells,toexploreth

4、enewwayofgenetherapyinpthalassemia.TargetedASONofalphaglobinwasdesignedandsynthesized,andcomparedwithpositivecontrol[senseoligodeoxynucleotide(SON)group]andblankcontrol.Byliposomaltransfection,ASON,SONwascoculturedwithK562.Theefficiencyoftrasfectionwasassayedbyflu

5、orescencemicroscopyandflowcytomctry(FCM),thealphaglobingeneexpressionofK562wasmeasuredbyrealtimePCR,andtheproliferationofK562wasdeterminedbyCellCountKit8assay.Theresultsindicatedthatthehighestefficiencywasat24hoursafterliposomaltransfection，thegeneexpressionlevelo

6、falphaglobininASONgroupwassignificantlylowerthanthatinSONgroupandblankcontrol(p0.01).TheproliferationofK562cellswasobviouslyinhibited，meanwhiletheaboveeffectshowedthedosedependentmanner.ItisconcludedthattheliposomaltransfectionofASONinhibitsthealphaglobingeneexpre

7、ssionofK562cells，whichmaybethenewtargetforgenetherapyinPthalassemia.Keywordsalphaglobingene;liposometransfection;antisenseoligodeoxynucleotide;K562cell;cellproliferation;pthalassemiaJExpHematol2007;15(5):1065-1069p地中海贫血是一种对人类健康危害严重的遗传性溶血性贫血病，其病理特征是P珠蛋白基因发生突变，引起P珠蛋

8、白链合成减少，造成ot与非a珠蛋白链的比例失衡，a珠蛋G链过剩，在红细胞内形成包涵体，导致骨髓无效红细胞生成和溶血。理论上基因治疗是最理想的方法，因而近20年来基凶调控成为倍受人们关注的（3地屮海贫血治疗方法之一。□前针对（3地屮海贫血的基因调控治疗研究较多的停留在导入:lh:常的P珠蛋0基因，或对剪接