医学毕业论文内质网相关的凋亡途径在高三尖杉酯碱诱导mutz-1细胞凋亡过程中的作用

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1、内质网相关的凋亡途径在高三尖杉酯碱诱导MUTZ-1细胞凋亡过程中的作用姓名：2014年6月25日内质网相关的凋亡途径在高三尖杉酯碱诱导MUTZ-1细胞凋亡过程中的作用作者：胡洁何冬花高良杨春虎蔡真【摘要】本研究探讨高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)诱导人MDS细胞株MUTZ-1细胞凋亡的作用机制。以HHT处理骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1(MDS-RAEB),用流式细胞术检测细胞凋亡率，用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度和线粒体膜电位变化，应用RT-PCR检测HHT处理前后与内质网应激有关的綦因(CHOP，BIP,XBP1)的表达情况。结果表

2、明：0.05pg/mlHHT作用MUTZ-1细胞的凋亡率随着时间的延长而增加，其差异具有统计学意义(P0.01);激光共聚焦结果显示，0.05gg/mlHHT作用后4小吋胞浆内Ca2+浓度增高，12小时达高峰，其后开始下降；HHT作用后线粒体膜电位持续下降；CHOP以及BIP，XBP1基因表达增强，12小时达到高峰，其后开始下降。结论：HHT可以诱导MDS细胞株MUTZ-1凋亡，内质网相关的凋亡途径在其屮发挥丫重要的作用。【关键词】高三尖杉酯碱；MDS细胞株MUTZ-1；细胞凋亡；内质网应激RoleofEndoplasmicReticulumPathwayinApoptosi

3、sofMDSCellsInducedbyHomoharringtonineAbstractThestudywasaimedtoinvestigatetheapoptoticmechanismofhomoharringtonine(HHT)onMDScellline(MUTZ-1cells).TheapoptosisofMUTZ-1cellsinducedbyHHTwasmeasuredbyflowcytometry.Theconcentrationofcystosoliccalciumwasmeasuredwiththemitochondrialmembranepotenti

4、albyconfocal.ThemRNAexpressionlevelofCHOP，BIPandXBP1weredetectedbysemi-quantitativeRT-PCR.TheresultsshowedthatafterexposureofMUTZ-1toHHTfordifferenthours，thepercentageofapoptoticMUTZ-1cellsincreasedinatimedependentmanner.TypicalapoptoticcellsandreleaseofCa2+fromthecytosolicCa2+storageandthe

5、lossofmitochondrialmembranepotentialwereobserved.RT-PCRanalysisrevealedthatmRNAsforendoplasmicreticulum(ER)stress-associatedproapoptoticfactorCHOPandERchaperoneBIP，XBP1markedlyincreasedat4hoursaftertreatinentwith0.05

6、ig/mlHHTandreachedthetoplevelat12hours，andthendecreased.ItisconcludedthatH

7、HTnotonlyinhibitsMUTZ-1growthbutalsoinducesMUTZ-1apoptosis.TheHHT-inducedMUTZ-1celldeathislikelymediatedbytheERstresspathway.Keywordshomoharringtonine;MUTZ-1cell;apoptosis;ERstress骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性的造血干细胞疾病，病理生理学改变为造血前体细胞成熟障碍和过度增殖，易于向白血病转化［1，2］，其发病和治疗机制是目前临床研宄的热点。高三尖杉酯碱(HHT)是我国自主研制成功的高效抗0

8、血病药物［3］,临床上用来治疗MDS取得一定的疗效，本研宂组前期工作表明HHT主要通过诱导细胞凋亡发挥抗白血病作用［4］，我们进一步研究表明，在此过程中内质网发挥了重要的作用。材料和方法主要试剂HHT(1mg/ml)购自杭州民生药厂，在使用之前用RPMI1640CRPMI1640干粉购自Gibco公司)稀释至所需浓度。Fluo3/AM购自美国Biotum公司，JC-1购自Sigma公司，Anncxin-V/PI,Mito-tracker,ER-trackcr购自Molecularprobe公司，鼠抗人灾