医学毕业论文甲基化修饰对人宫颈癌细胞系中fhit基因的调控

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1、甲基化修饰对人宫颈癌细胞系中FHLT基因的调控姓名：2014年6月25日甲基化修饰对人宫颈癌细胞系中FHIT基因的调控【摘要】H的探讨FHIT在子宫颈癌发生中的作用及FHIT基因失活的机制。方法培养宫颈癌细胞C33A、HcLa,CasKi、SiHa及人脐静脉血管内皮细胞ECV304,进行5azadC干预前后FHIT基因在5株细胞屮的甲基化分析，并通过逆转录聚合酶链式反应和免疫荧光化学染色方法检测5azadC干预前后FHIT基因在5株细胞中的表达。结果4种宫颈癌细胞均存在FHIT基因的甲基化，正常对照细胞ECV304在5azadC干预前后均未见明显FHI

2、T基因扩增产物。4株宫颈癌细胞在5azadC化学干预前均未见明显FHIT的荧光着色，而干预后的细胞胞浆屮可见FHIT的表达强度明显増强，尤其在106M及2x106M干预浓度下的表达最强(P0.05);干预48h、72h后FHLT的表达与干预24h的类似。ECV304细胞在5azadC化学干预前后的胞浆均可见到FHIT的阳性表达，其表达强度之间无明显差异(P0.05)。结论FHIT基因的甲基化在宫颈癌中是频发事件，甲基化可能是FHIT基因沉默及宫颈癌发生的重要机制。【关键词】脆性组氨酸三联体基因(FHIT)；人宫颈癌细胞系；5azadC;DNA甲基化；免

3、疫荧光PatternofFHITGene5’CpGIslandMethylationContributetoHumanCervicalCarcinomaCellTumorigenesisAbstract：ObjectiveTodeterminewhetherhypermethylationofFHITplayedanimportantroleincervicaltumorigenesis.MethodsByincubatingDNAinthepresenceofamethylase,weinvestigatedthemethylationofFHITi

4、nfourcervicalcancercelllinesandonehumanumbilicalveinendothelialcelllinetreatingwiththeDNAmethyltransferaseinhibitor,5aza2’deoxycytidine(5azadC).TheexpressionofFHITwasalsomonitoredbyRTPCRandimmunofluorescencetechniquebeforeandafter5azadCtreatment.ResultsWefoundthatmethylationofFH

5、IToccurcdinthefourcervicalcancercelllinesinsteadoftheECV304.ThroughRTPCRandimmunofluorescencetechnique,wefoundthattheexpressionofFHIT,whichcouldhardlybedetectedinallfourcervicalcancercells,wassignificantdifferentafter5azadCtreatment.However,theECV304cellexpressedFHITatconstantle

6、velsbeforeandafter5azadCtreatment.ConclusionWeconcludedthathypermethylationofFHITgeneoccurredfrequentlyincervicaltumorigenesis.AndhypermethylationwithintheregulatorysequencesofFHITgenemightbeanimportantmeansforitsinactivationincervicalcancerKeywords：FragileHistidineTriadGene(FHI

7、T);Humancervicalcancercelllines;5aza2’deoxycytidine;DNAmethylation;Immunofluorescencetechnique0引言脆性组氨酸三联体(FHIT)基因是近年发现的第1个将染色体脆性位点和肿瘤相联系的候选抑癌基因，FHIT蛋白表达卜调的肿瘤细胞更具有恶性表型和恶性行为，因而它很可能是一种在多种肿瘤发生中起重要作用的肿瘤抑制基因，但它通过何种机制发生作用尚不清楚。研宄发现DNA5’CpG岛甲基化在基因表达、肿瘤发生过程中起重要作用［1］，但目前国内外对于甲基化引起FHIT基因失活及

8、其与肿瘤发生的关系在宫颈癌方而的研宄还很少，所以本文通过研允在DNA甲基转移酶抑制剂5氮脱氧胞