医学毕业论文苦参碱对大鼠原代培养皮质神经元gabar蛋白表达的影响-

《医学毕业论文苦参碱对大鼠原代培养皮质神经元gabar蛋白表达的影响-》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、苦参碱对大鼠原代培养皮质神经元GABAR蛋白表达的影响姓名：2014年6月25日苦参碱对大鼠原代培养皮质神经元GABAR蛋白表达的影响【摘耍】目的观察苦参碱对大鼠原代培养皮质神经元Y-氨基丁酸受体(GABAR)蛋白表达的影响，探讨苦参碱抑制中枢的作用机制。方法对Wistar新生大鼠原代培养皮质神经元分别给予剂量为0.5、1.0、2.0mmol/L培养基的苦参碱进行药物干预,4h后用细胞免疫组化方法测定GABAR的蛋白表达。结果与阴性对照组相比，各给药组神经元GABAR蛋白表达均显著增加(P0.05)。结论苫参碱使GABAR蛋

2、白表达增强。【关键词】苦参碱;神经元；Y-氨基丁酸受体【Abstract】ObjectiveTostudythemechanismoftheinbitoryeffectofmatrineoncentralnervous.MethodsInthepresentstudy,incubationofpostnatalWistarratcortexneuronsinculturewithmatrineat0.5，1.0,2.0mmol/L(medium)wascarriedouttohaveknowledgeoftheeffecto

3、fmatrineontheexpressionsofGABAR.ResultsImmunocytochemistryshowedasignificantup-regulationofGABARafter4hoursofmatrinetreatmentcomparedwiththecontrol(P0.05).ConclusionTheresultsdemonstratethatmatrinecanincreasetheexpressionofGABAR.【Keywords】matrine;neuron;GABAR(y-ami

4、nobutyricacidreceptor)苦参碱(matrine,Mat)是豆科植物苦参、苦豆子、广豆根等中草药的活性成分，是苦参碱类生物碱的代表。现已发现Mat具有中枢抑制作用[1〜3],但其作用机制少有报道。本文通过观察Mat对神经元抑制性受体y—氨基丁酸受体(GABAR)的蛋白表达量的影响，探讨Mat的中枢抑制作用机制。1材料与方法1.2主要实验试剂和仪器细胞培养基DMEM（Gibco）,胎牛血清和胰蛋白酶(Hyclone),卵清蛋白和DAB(Sigma),N-2Supplement(Gibco)。C02培养箱(NA

5、PCO)，1X70倒置显微镜(Olympus)，閔像分析系统(Image-Proplus4.0)。1.3分离式原代神经元培养1.3.1神经胶质细胞滋养层培养取新生Wistar大鼠，取大脑皮质。机械吹打，调节细胞悬液浓度为3xl05/ml，置于孵箱中培养。2周后，胶质细胞呈亚融合状态，制备成胶质细胞滋养层。1.3.2原代神经元培养取新生Wistar大鼠，取大脑半球，胰酶消化，接种于多聚赖氨酸包被的盖玻片上，调整细基础学院药理教研室胞数为3x103/片。静置，待细胞贴壁，将载有细胞的盖玻片移入上述胶质细胞滋养层培养皿中。接种后第

6、2天加阿糖胞苷抑制胶质细胞生长。1.4分组及给药神经元培养第6天随机分为4组，分别给予含有0、0.5、1.0、2.0mmol/L培养基的Mat溶液。1.5细胞免疫组化法观察Mat对氨基丁酸受体（GABAR）蛋白表达的影响取出载有神经元的盖玻片，4%多聚甲酸冰上固定30min。血清封闭30min后，GABAR—抗（1:200）4°C过夜，生物素标记二抗（1:200）室温2h,辣根酶标记链亲合素（h200）室温lh，DAB显色。系列浓度酒精梯度脱水，二甲苯透明，封片。1.6光密度分析每个剂量组随机观察150个细胞，利用图像分析系

7、统（Image-ProPlus4.0）釆集图片，进行光密度分析。以光密度值为计量资料，用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。2结果与分析原代培养至第6天，神经元发育成熟，胞体饱满，神经元间形成网络连接。免疫组织化学实验后，神经元仍保持了形态上的完整，为定量分析提供了保证（图1、2）。苦参碱对GABAR蛋白表达的影响见图3。从图1、2、3可以看出，与阴性对照组相比，Mat各剂量组GABAR蛋白表达均明显增强（P0.05），并奋剂量依赖趋势。注：与阴性对照组比较，*P0.053讨论Y—氨基丁酸（GABA）是中枢神经系统内最重

8、要的抑制性神经递质，大约有20%〜30%的中枢突触主要是以GABA作为神经传导递质。GABAR分布广泛，主要介导中枢抑制效应。GABAA受体在神经系统广泛分布，因而GABA对巾枢神经系统各部位神经元都有普遍的抑制性作用，GABAA受体主要介导突触后抑制效应，GABA和GABAA受体结合，引