己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制

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1、己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制【摘要】目的：观察己酮可可碱（PTX）对大鼠溃疡性结肠炎（UC）模型的治疗作用，探讨血栓及血栓前状态（PTS）在溃疡性结肠炎发病中的作用和己酮可可碱作用机制.方法：用2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)造大鼠溃疡性结肠炎模型，将大鼠模型随机分为模型组，模型+生理盐水组，模型+己酮可可碱组，另设空白对照组，共4组.观察各组大鼠肠道大体形态和组织学改变；采用血小板黏附仪检测血小板黏附功能(PAdT)，智能血液凝聚仪检测血小板的聚集功能(PAgT)；ELISA法测定血清中的血栓烷B2（TXB2）；单克隆酶联

2、吸附法检测血管性假血友病因子相关抗原（v1）.结果：与模型+生理盐水组比较，模型+己酮可可碱组损伤指数下降(6.02±0.74vs0.85±0.50,P0.01;5.68±0.60vs1.08±0.45,P0.01)；模型组血小板黏附率和聚集率与空白对照组无明显增加（P>0.05）；模型组TXB2,v1均较空白对照组的差异无统计学意义（P0.01），经己酮可可碱治疗后，均较模型+生理盐水组降低（P0.05）.结论：TNBS所诱导大鼠溃疡性结肠炎模型与PTS有一定关系.PTX通过抗凝、抗炎症介质、抗细胞因子而发挥治疗UC作用.【关键词】

3、己酮可可碱；结肠炎,溃疡性；血小板功能试验；炎症介质；细胞因子　　0引言　　溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis,UC）发病机制尚未明确，在活动期肠粘膜呈弥漫性充血水肿，且有出血点、溃疡存在.UC与血栓及血栓前状态有密切的关系，并应用肝素治疗取得一定疗效〔1-2〕.抗凝常用药己酮可可碱毒副作用小，使用安全，有抗血小板、抗脂质过氧化、免疫抑制作用等，因此可能对UC具有一定的抗炎作用.本研究旨在探讨己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎模型的治疗作用及其作用机理.　　1材料和方法　　1.1材料　　健康SD大鼠(由上海实验动物中心提供)60只，雄性

4、，体质量150～200g，正常喂养；2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)为Sigma公司产品，血管性假血友病因子相关抗原（v1）试剂盒购自华美公司.SH293智能血液凝聚仪(购自上海生化仪器厂)，血小板粘附两用仪(无锡电子仪器二厂产)；己酮可可碱（PTX）(上海第十六制药厂提供).　　1.2方法　　1.2.1动物分组及处理　　将60只大鼠随机分为正常对照组(简称N组),模型组(简称M组),模型+生理盐水组（简称NS组），模型+己酮可可碱组（简称PTX组）.正常对照组、模型组各20只，其余每组10只.正常对照组不作任何处理.　　1.2.2大鼠U

5、C模型的建立及处理　　SD大鼠术前禁食24h，自由饮水，实验时乙醚麻醉，用一直径2.0mm,长约12cm的硅胶管由肛门轻缓插入深约8cm，实验各组以含150mg/kgTNBS的等体积乙醇溶液0.5mL缓慢注入结肠，让动物保持平躺，自然清醒.模型造成后（第4日），N组、M组各随机选10只大鼠，禁食两天后断颈处死，处死前穿刺心脏取血，每只约2~3mL，冻存备用，所剩10只正常喂养.NS组以生理盐水2mL/次，PTX组按8mg/kg(溶解于2mL生理盐水中)灌胃，2次/d.3L，冻存备用.所有处死大鼠，剖取远端结肠8cm，沿纵轴切开，生理盐水迅速冲净

6、，置于标本体积10倍以上的甲醛溶液中固定.　　1.2.3结肠粘膜损伤评分　　大体形态评分：将福尔马林固定后的结肠标本肠粘膜层向上平铺于硬纸板上，用大头针固定，并保持在生理盐水中，用放大镜观察粘膜急性损伤程度，并按下列标准评分：0分：无损伤；1分：局部充血、水肿但未出现溃疡；2分：有溃疡，但没有明显炎症；3分：有溃疡，仅有一处出现炎症；4分：有多处溃疡和炎症，溃疡大小1cm；5分：有多处溃疡和炎症：至少有一处溃疡大小>1cm.组织学损伤评分：包括溃疡炎症肉芽肿、纤维化，按有无及轻重计为0，1，2分，病变深度(达粘膜下层1分，肌层2分，浆膜层

7、3分)各项相加得总分.　　1.2.4血清指标检测方法　　采用ELISA法检测TXB2，单克隆酶联吸附法检测v1(均按试剂盒说明).血小板粘附两用仪检测血小板粘附功能(PAdT),32g/L枸橼酸钠按1∶9抗凝；用SH293智能血液凝聚仪检测血小板的聚集功能(PAgT)，用2μmol/L二磷酸腺苷作诱导剂，测定最大聚集率.　　统计学处理：实验结果以x±s表示，采用SPSS10.0软件包进行方差分析及多重比较.　　2结果　　2.1一般情况　　大鼠造模型1d后，开始逐渐出现懒动、拱背、厌食、大便次数增多、软便或稀便、大便末端有粘液或脓点等表现.3d

8、后症状达到高峰,大鼠毛色无华、变脆，嗜卧扎堆，大便完全为稀便，带脓血.N组大鼠无腹泻、懒动等异常改变.　　2.2肠组织大体形态　　造模型3d后，M组处