己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制论文

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1、己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制论文【摘要】目的：观察己酮可可碱（PTX）对大鼠溃疡性结肠炎（UC）模型的治疗作用，探讨血栓及血栓前状态（PTS）在溃疡性结肠炎发病中的作用和己酮可可碱作用机制.方法：用2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)造大鼠溃疡性结肠炎模型，将大鼠模型随机分为模型组，模型+生理盐水组，模型+己酮可可碱组，另设空白对照组，共4组.观察各组大鼠肠道大体形态和组织学改变；采用血小板黏附仪检测血小板黏附功能(PAdT)，智能血液凝聚仪检测血小板的聚集功能(PAgT)；ELISA法测定血清中的血栓烷B2（TXB2）；单克隆酶联吸附法检测血管性假血友病因

2、子相关抗原（v1）.结果：与模型+生理盐水组比较.freela公司产品，血管性假血友病因子相关抗原（v1）试剂盒购自华美公司.SH293智能血液凝聚仪(购自上海生化仪器厂)，血小板粘附两用仪(无锡电子仪器二厂产)；己酮可可碱（PTX）(上海第十六制药厂提供).1.2方法1.2.1动物分组及处理将60只大鼠随机分为正常对照组(简称N组),模型组(简称M组),.freelm,长约12cm的硅胶管由肛门轻缓插入深约8cm，实验各组以含150mg/kgTNBS的等体积乙醇溶液0.5mL缓慢注入结肠，让动物保持平躺，自然清醒.模型造成后（第4日），N组、M组各随机选10只大鼠，禁

3、食两天后断颈处死，处死前穿刺心脏取血，每只约2~3mL，冻存备用，所剩10只正常喂养.NS组以生理盐水2mL/次，PTX组按8mg/kg(溶解于2mL生理盐水中)灌胃，2次/d.3L，冻存备用.所有处死大鼠，剖取远端结肠8cm，沿纵轴切开，生理盐水迅速冲净，置于标本体积10倍以上的甲醛溶液中固定.1.2.3结肠粘膜损伤评分大体形态评分：将福尔马林固定后的结肠标本肠粘膜层向上平铺于硬纸板上，用大头针固定，并保持在生理盐水中，用放大镜观察粘膜急性损伤程度，并按下列标准评分：0分：无损伤；1分：局部充血、水肿但未出现溃疡；2分：有溃疡，但没有明显炎症；3分：有溃疡，仅有一处出现炎

4、症；4分：有多处溃疡和炎症，溃疡大小1cm；5分：有多处溃疡和炎症：至少有一处溃疡大小1cm.组织学损伤评分：包括溃疡炎症肉芽肿、纤维化，按有无及轻重计为0，1，2分，病变深度(达粘膜下层1分，肌层2分，浆膜层3分)各项相加得总分.1.2.4血清指标检测方法采用ELISA法检测TXB2，单克隆酶联吸附法检测v1(均按试剂盒说明).血小板粘附两用仪检测血小板粘附功能(PAdT),32g/L枸橼酸钠按1∶9抗凝；用SH293智能血液凝聚仪检测血小板的聚集功能(PAgT)，用2μmol/L二磷酸腺苷作诱导剂，测定最大聚集率.统计学处理：实验结果以x±s表示，采用SPSS10.0

5、软件包进行方差分析及多重比较.2结果2.1一般情况大鼠造模型1d后，开始逐渐出现懒动、拱背、厌食、大便次数增多、软便或稀便、大便末端有粘液或脓点等表现.3d后症状达到高峰,大鼠毛色无华、变脆，嗜卧扎堆，大便完全为稀便，带脓血.N组大鼠无腹泻、懒动等异常改变.2.2肠组织大体形态造模型3d后，M组处死大鼠结肠标本表现为黏膜充血、水肿、溃疡形成，结肠组织与周围组织粘连.而N组结肠标本粘膜光滑，无溃疡，腺体排列整齐(图1A,B).2.3PTX对大鼠溃疡性结肠炎大体形态及组织学损伤的影响M组组大鼠结肠标本表现为黏膜充血、水肿、溃疡形成，结肠组织与周围组织粘连，可见近端肠腔扩张.溃疡

6、呈线状和灶状，周围可见黏膜增厚、肠腔狭窄.光镜下可见溃疡及炎性渗出物，可见上皮细胞坏死、脱落，有淋巴组织增生，大量中性粒细胞浸润，可见数量不等的单个核细胞和嗜酸性粒细胞，也可见增生的纤维母细胞.PTX组黏膜水肿少见，无溃疡和炎性渗出物，光镜下腺体排列整齐,仅见少量淋巴细胞和中性粒细胞浸润，损伤指数低于模型组及生理盐水组(P0.01,表1，图2A,B).表1各组大鼠结肠大体形态和组织学损伤评分比较(略)2.4血小板黏附功能、聚集功能的变化造模3dN组和M的PadT,PagT差异无统计学意义(P0.05).3boembolismininflammatorybobraR,Looe

7、lbostadH.LPSStimulatedPMNactivationandproinflammatorymediatorsynthesisisdoa,2004,57(6):1157-1162.