荧光pcr检测mp-dna在儿童肺炎中的应用

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1、焚光PCR检测MP-DNA在儿童肺炎中的应用（内江市中医医院检验科四川内江641000）【摘要】目的：研究荧光PCR检测MP-DNA在儿童肺炎诊断中临床应用价值。方法：选择132例儿童呼吸道感染患者，以0〜4岁为试验组，其他年龄段患者为对照组，分别行荧光PCR检测咽拭子或深部浓痰中MP-DNA,被动凝集法检测患者血清中MP-Ab。结果：试验组荧光PCR阳性率为20.3%、被动凝集法阳性率为8.5%;对照组荧光PCR阳性率为20.1%、被动凝集法阳性率为30.1%;经卡方检验，荧光PCR检测两组别χ2=0.19，P>0.05无统计学差异，被动

2、凝集法检测两组别χ2=10.7,P<0.05有统计学差异。结论：荧光PCR具有特异性强，灵敏度高的特点，尤其在婴幼儿的肺炎支原体检测中，考虑患者免疫系统发育未全因素，荧光PCR更具优势。【关键词】肺炎支原体（MP）;荧光PCR;被动凝集法；【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）36-0161-02支原体肺炎多发于婴幼儿及儿童的呼吸道感染，潜伏期2〜3周，临床症状较轻，表现为头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，难与其他细菌、病毒引起的肺炎鉴别，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，但多在秋冬时节

3、。笔者回顾性分析了20014年7只至2015年6月我院儿科132例呼吸道感染患者临床资料，结果如下：1.研究对象与方法1.1研究对象132例患者均来自我院儿科门诊或住院病人，以年龄≤4岁为试验组共59例，其中男性27例，女性32例，平均年龄2.3岁；年龄〉4岁为对照组共73例，其中男性33例，女性40例，平均年龄8.1岁。1.2方法1.2.1患者清晨使用一次性吸痰器取深部浓痰，或用咽拭子取咽峡部分泌物立即送检，做MP-DNA荧光PCR检测，扩增仪器为ABI7300,试剂由中山大学达安生物有限公司提供，反应循环条件：93°C2min；93°C45s,

4、55°C60s,10个循环；93°C30s,55°C45s,30个循环。以扩增曲线呈S型，CT值<30为实验结果阳性。1.2.2同吋抽取患者2ml静脉血注入干燥试管中，分离血清，被动凝集法检测MP-Ab(IgM/IgG)，试剂使用日本富士瑞必欧株式会社试剂盒，致敏粒子与患者血清中MP-Ab可发生凝集反位，以实验中出现凝集现象为阳性。1.3统计学处理使用统计学软件SPSS14.0进行数据分析处理，两组率的比较采用卡方检验。1.结果两组别荧光PCR与被动凝集法的阳性率见下表：荧光PCR检测试验组与对照组经卡方检验χ2=0.19，P=0.67(P

5、>0.05)无统计学意义；被动凝集法试验组与对照组经卡方检验χ2=10.7,P=0.001(P<0.05)有统计学差异。2.分析肺炎支原体是引起婴幼儿及儿童肺炎的主要病原体，检测方法主要是分离培养、血清学检测，分离培养是病原学的金标准但要求条件比较严格，一般基层医院难以满足，且时间较长，需要10〜14天［1］,临床应用比较少。血清学检测比较方便，局限性表现为假阳性及假阴性偏高［2】，近年随着分子诊断的普及，荧光PCR逐渐在MP的早期诊断中呈现出优势，荧光PCR与常规PCR比较，最大优势在于加入了荧光标记探针，避免了非特异性扩增造成的假

6、阳性信号，特异性强，灵敏度高。从实验数据可得，试验组与对照组，荧光PCR检测无统计学差异，肺炎支原体在0〜4岁婴幼儿及4岁以上儿童感染率相近，被动凝集法在两组别中的检出率有统计学差异，被动凝集法属于血清学实验，主要检测MP-IgM和MP-IgG,MP-IgM属于出现较早的抗体，在感染7天左石达到检出限，10-20天高峰，持续12〜16周［3］，在0〜4岁组婴幼儿免疫系统尚在发育成熟阶段，MP-Ab产生比较微量或无，表现为被动凝集法检测阳性率过低，荧光PCR直接检测病原体DNA,两组检出率无差异。冇研究报道荧光PCR检出率与被动凝集法检出率符合率低［4］,

7、笔者从临床检测观察与上述观点相同，被动凝集法MP-Ab的窗U期在7天左右，荧光PCR直接测病原体不存在此现象，早期诊断荧光PCR奋优势，荧光PCR检测标本为咽拭子或痰液，标本的取样存在随机性，病原体分布不均，对检出率冇一定的影响，另痰液中的黏蛋白去除是否充分对DNA的提取也有一定的影响。综上所述，荧光PCR与被动凝集法各具优势，联合诊断更能提高MP感染的检出率，在婴幼儿的诊断中荧光PCR更具优势。【参考文献】［1】季伟，陈正荣，张爱丽等.荧光PCR和定量EUSA在呼吸道肺炎支原体感染诊断中的应用［J】.临床儿科杂志，2009，27(7)：625-627.

8、［2】邹映雪，马翠安，夏宇靖等.儿童肺炎支原体肺炎的临床诊断分析［」］.临床儿科