中国南海红树林内生真菌zzf42次级代谢产物的研究

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1、中国南海红树林内生真菌ZZF42次级代谢产物的研究报告人：吴春燕学号：04328040专业：应用化学（化学生物学）导师：刘岚副教授报告提纲选题意义国内外研究现状研究思路实验及讨论结论选题意义海洋真菌是海洋微生物的一个重要分支。从海洋真菌分离出的次级代谢物中约70％－80％具有生物活性。红树林内生真菌代谢产物包括生物碱类(杂环生物碱、大环生物碱等)，大环内酯，环肽类，醌类，萜类，聚醚类，甾醇类，多糖类，不饱和脂肪酸等。从红树林内生真菌ZZF42已发现的代谢产物：1-甲基-β-咔啉N-甲基-1-甲基-β-咔啉吲哚-3-乙酸4-甲氧基-8-羟基-喹啉环-（苯丙-

2、酪）二肽4-羟基-α-苯乙酸据此可看出，红树林内生真菌F42能产生结构独特、骨架新颖并具有生物活性的代谢产物，而产物中被分离鉴定出的化合物还比较少，故该菌具有进一步研究的潜力。研究思路传统途径创新途径微生物大量培养培养物收获纯组分代谢产物分离结构鉴定是否新化合物药理活性测试混合组分时间长，损耗大组分信息获知选择好的分离条件纯化MSGC-MS培养菌种配制培养液200L接菌发酵40天收菌菌体晒干MO浸泡一个月MO提取物EA萃取5次EA提取物培养液：60℃下200L5L前期准备工作——重蒸溶剂、查阅文献等（07.11——07.12）实验与讨论菌株培养发酵（

3、08.01——08.03）分离、鉴定代谢产物（08.03——08.05）关于培养液中代谢产物的讨论PE:EA=1∶2（体积比）洗脱得到的组分经反复柱层析、薄层制备色谱纯化，得到:浅黄色粉末Rf≈0.25Rf≈0.70展开剂：EA展开剂：10%MO-EA碘缸显色RT=1.65sEI-MS:RT=1.65s及RT=2.38s处各存在一个峰RT=2.38sEI-MS环（苯丙-苯丙）二肽环（甘-苯丙）二肽1HNMR分析（溶于氘代DMSO）δH9.19(brs)δH6.81～6.83(d,J=8.1)6.64～6.67(d,J=8.1)如果真的存在环（苯丙-酪）二

4、肽，它为什么不能被EI检测出来？EI源要求固、液态样品汽化后再进入离子源，因此不适合难挥发和热不稳定的样品。环（苯丙-酪）二肽：mp291～293℃难挥发化合物APCI：大气压状态下进行的化学电离MS2：母离子和子离子的关系APCI-MS2分离、鉴定APCI-MS2样品的（+）APCI全扫描质谱图母离子m/z311.1的二级全扫描质谱图母离子m/z295.1的二级全扫描质谱图母离子m/z205.1的二级全扫描质谱图环（苯丙—酪）二肽的裂解途径结论混合组分先送质谱分析，可基本确定其成分，再根据个人经验或查阅文献，能找出有效的分离条件（展开体系），如此，既提

5、高效率，又能防止微量成分的损失。环（苯丙-酪）二肽环（苯丙-苯丙）二肽环（甘-苯丙）二肽关于菌体代谢产物中低极性部分的讨论菌体：用甲醇浸泡甲醇提取物甲醇相正己烷相展开剂：20%EA-PE脂肪酸脂肪酸甘油酯GC-MS硫酸-甲醇甲酯化红树林内生真菌ZZF42菌体代谢产物低极性部分硫酸-甲醇酯化后的GC/MS总离子流色谱图序号保留时间t/min化合物分子量分子式相似度相对含量（%）113.08α-柏木烯204C15H248580.85219.96十四酸甲酯242C15H30O28710.54321.27十五酸甲酯256C16H32O28481.00424.06

6、(9Z)-十六碳烯酸甲酯268C17H32O28293.86524.76十六酸甲酯270C17H34O283339.78629.64（9E，12E）-十八二烯酸甲酯294C19H34O283122.75729.92(9Z)-十八烯酸甲酯296C19H36O282527.45830.58十八酸甲酯298C19H38O28474.26红树林内生真菌ZZF42菌体代谢产物低极性部分硫酸-甲醇酯化后的化学成分及其相对含量结论红树林内生真菌ZZF42菌体的低极性代谢产物甲酯化后含有八种成分，分别为：α-柏木烯、十四酸甲酯、十五酸甲酯、(9Z)-十六碳烯酸甲酯、十六酸

7、甲酯、（9E，12E）-十八二烯酸甲酯、(9Z)-十八烯酸甲酯、十八酸甲酯。一般认为，低极性部分=脂肪酸/脂肪酸酯可能还有其它物质，如萜类等。致谢本论文是在导师刘岚副教授的悉心指导下完成的。刘老师对实验进展十分关注，从理论上和实践上给予了我非常深入细致的教导。是刘老师的信任和支持使我有了许多锻炼的机会，从学习灭菌接菌、过柱分离到核磁培训、测试、解谱，是刘老师的精心栽培使我的实验技术和科学素养都上升到一个新的高度。刘老师拥有渊博的专业知识，严谨的治学态度和勤奋踏实的科研作风，是我将来学习工作中的楷模。在此，衷心感谢刘老师对我的谆谆教诲和深切关怀！感谢林永成教

8、授，佘志刚副教授，许芳师姐，马欢歌师姐，杨昌师兄，高俊平师兄，陈彬