通肾汤对阿霉素肾病综合征大鼠肾小球基底膜的影响论文

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1、通肾汤对阿霉素肾病综合征大鼠肾小球基底膜的影响论文章文平，王桦，胡小瑛，江英能，宋国维【关键词】通肾汤摘要：【目的】探讨通肾汤治疗肾病综合征的作用机理。【方法】采用阿霉素肾病综合征大鼠模型及多聚亚胺染色方法，检测肾小球基底膜(GBM)上的阴离子位点数。【结果】正常大鼠GBM上阴离子位点分布以外疏松层为主；阿霉素肾病综合征模型大鼠GBM上阴离子位点较正常组减少(Ｐ＜001)，外疏松层减少更为明显；通肾汤能够使GBM阴离子位点恢复正常，与阿霉素肾病综合征大鼠模型组比较具有显著性差异(Ｐ＜005).freelL，置冰箱备用；将通肾汤按照儿童剂量的125倍即25?g/k

2、g给予大鼠；强的松片(5?mg/片，浙江仙居制药有限公司出品，批号：030401)，按照小儿剂量125倍即25?mg/kg给予大鼠；阿霉素(10?mg/支，深圳万乐药业有限公司出品，批号：0305E1)；多聚亚胺(Sigma公司出品，批号：27FD041)；锇酸(TEBCHEM公司出品，批号：00100180605004)。12动物分组、造模及给药选用健康SD大鼠40只，雄性，体重(100±10)g，普通级，由广州中医药大学实验动物中心提供，粤检证号：2001A056；随机分为正常组、阿霉素肾病模型组(模型组)、激素组、通肾汤组、激素+通肾汤组，每组各8只；除正

3、常组外的动物均按文献方法造模［３］，即于大鼠尾静脉以75?mg/kg一次性注射阿霉素溶液；肾病模型造模成功后，正常组、模型组以2?mL/d蒸馏水灌胃1次，激素组、通肾汤组、激素+通肾汤组按上述剂量灌胃，1次/d。1个月后测观察指标。13观察指标及测定方法肾小球基底膜(GBM)上阴离子位点数［４］采用多聚亚胺(PEI)染色方法进行检测。经大鼠尾静脉1次注射分子量为40?000～60?000道尔顿、浓度为10?g/L的PEI溶液1?mL(用生理盐水配制，并用盐酸将pH调至74)，25?min后处死动物，取肾脏标本，用01?mol/L、pH74的二甲胂酸盐缓冲液冲洗后

4、，置于25?g/L戊二醛―20?g/L磷钨酸固定液中固定2?h以上，再次用二甲胂酸盐冲洗后，10?g/L锇酸后固定，固定后的标本送电镜检查。每组标本观察3个肾小球，在5万倍放大的情况下拍摄30个GBM节段，计数时只用GBM平直的片段，从测定的GBM长度和计数的阴离子位点数，计算出平均每1?μmGBM内、外疏松层的阴离子位点数。14统计方法各组数据以(±s)表示，组间差异用t检验。2结果表1及图1表明，正常大鼠GBM上阴离子位点分布以外疏松层为主；模型组GBM上阴离子位点数较正常组减少(Ｐ＜001)；通肾汤组阴离子位点数恢复正常，与模型组比较有显著性差异(Ｐ＜00

5、5)；与强的松合用作用更明显。表1各组GMB上内、外疏松层阴离子位点数检测结果（略）3讨论肾脏的电荷屏障是由肾小球的多阴离子(GPA)及肾小球基底膜(GBM)上的阴离子位点两部分组成。GPA的主要成分是位于肾小球上皮细胞及内皮细胞表面的涎糖蛋白，带阴电荷成分主要是涎酸；GBM上的阴离子位点则由内、外疏松层的疏酸类肝素蛋白多糖(HSPG)组成，带阴电荷的成分主要是HSPG上的疏酸基团及多聚羧酸盐群。Mahan的研究发现，微小病变型肾病综合患者GBM外疏松层的阴离子位点明显低于正常人，在大量蛋白尿时阴离子位点几乎消失，经类固醇治疗达到缓解时，阴离子位点又在GBM外疏

6、松层出现［５］。黄清明等用清除法亦得到类似结果［６］。我们的实验发现，正常大鼠肾小球GBM上阴离子位点分布以外疏松层为主，阿霉素(ADR)肾病综合征模型的GBM阴离子位点较正常组减少(Ｐ＜001)，外疏松层减少更为明显，与文献报道结果一致［７，８］。阿霉素能与DNA形成一种复合物抑制DNA和RNA的合成［９］，这种复合物又是通过羧基的还原而代谢的［１０］，代谢产物氧化后形成活性氧类，活性氧可直接损伤脂膜，或刺激转录因子NFkB介导某些炎性细胞因子(TNFa，IL1，IL6)的基因表达［１１］。因此，阿霉素及其代谢产物直接损伤足细胞或使足细胞代谢紊乱，造成足细胞的

7、形态学及基底膜中阴离子位点改变，从而使肾小球滤过膜的分子屏障和电荷屏障受损，导致蛋白尿的发生。肾病综合征属中医水肿病阴水范畴，肺脾肾功能失调是其主要的发病机理。肾病综合征病程迁延，反复难愈。现代医学亦证实由于高脂血症、应用激素等因素，肾病综合征始终伴有高凝状态。高凝状态易使肾功能下降，严重影响治疗效果；且中医认为，气血同源，气能行水，血水互根，且病久多瘀，按照中西医结合理论及中医微观辨证理论，可认为肾病综合征过程中大都伴有气虚、血瘀、水停之证。通肾汤为益气活血化瘀的代表方剂，它针对肾病综合征始终存在的高凝状态，而确立组成药物，适用于肾病综合征的整个发病过程。本方

8、寓意益气、活血，以达行水