磁性免疫层析技术在氯霉素残留快速检测中的应用分析论文

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1、AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceDevelopmentofMagneticLateralFlowImmunoassaysforRapidDetectionofChloramphenicolResiduesCandidate:HuangWeiMajor:PharmaceuticalEngineeringSupervisor:Dr.YangHaiHuazhongUniversityofScienc

2、e&TechnologyWuhan430074，P.R.ChinaMay2012独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和

3、电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于 不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学硕士学位论文摘要在食品安全事故频发的今天，食品安全问题更加受到人们的关注，同时也对食品安全检测技术提出了更高的要求。氯霉素（Chloramphenicol，CAP）作为一种广谱抗生素，因其价廉高效，曾作为药物应用于人和

4、动物细菌性疾病的治疗，并作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业、水产业。现已证明，氯霉素对机体有很大的毒副作用，因此世界上许多国家明令禁止将此药用于可食用性动物。欧盟对氯霉素的检测限由原来的10μg/kg降至0.1μg/kg，比原标准要求提高了100倍；美国FDA规定的检出限也由原来的5μg/kg降为了0.3μg/kg。为了严格监控氯霉素的使用，抑制氯霉素引起的食品安全问题的发生，建立高效、灵敏、经济的氯霉素残留分析方法很有必要。磁性免疫层析法（magneticlateralflowimmunoassays，MLFIAs）作为快速

5、检测方法的新秀，以超顺磁性微球代替传统的胶体金作为信号标记物，即可以通过肉眼观察或光学比色法实现快速定性分析，又可以进一步利用超顺磁材料特殊的磁信号实现免疫层析技术的定量化检测。本论文考查了几种不同来源的超顺磁性纳米微球，筛选了适用于免疫层析分析的磁球，研究优化了磁性免疫层析条件，建立了一种将免疫磁分离与免疫磁层析相结合的磁性免疫层析快速检测新方法，并将其用于氯霉素残留的快速检测。主要研究内容包括：1)筛选出适合进行磁性免疫层析的磁性纳米粒：主要对8种不同来源超顺磁性微球的性能进行了对比，选择出了适合进行磁性免疫层析的磁球

6、A和磁球D。2)优化了磁微粒免疫层析条件：比较了磁球A和磁球D在不同盐浓度和pH下的性能差异。研究了不同上样缓冲液配方对磁球展层的影响，发现表面活性剂和高浓度蛋白对于磁球的展层具有明显促进作用，磁球A在0.05%以上的Tween20中就可以完全展层，在5%以上的BSA中就可以部分展层，后使用含5%BSA和1%Tween20的0.01MPBS作为上样缓冲液。研究了干I华中科技大学硕士学位论文燥对磁球展层的影响，发现干燥后的磁球更趋向于团聚。由于磁球D同小鼠IgG的偶联物，会发生团聚而影响展层，故最终选用磁球A开展氯霉素残留检

7、测方法研究。3)建立了氯霉素残留的磁性免疫层析检测新方法：从磁球与抗氯霉素单抗的偶联条件，T点、C点的包被条件，及免疫磁分离技术用于样品处理等条件，对氯霉素的检测进行了优化。选择CB作为包被缓冲液，C点的GAM最佳包被浓度为1:100倍稀释，T点为1:5倍稀释。磁球：mAbCAP最佳偶联比为100:1。100:1的偶联比与25:1的比较，CAP检测限由10ng/mL降低到了4ng/mL以下。建立了使用磁分离的方法处理大体积样品的方法。本研究建立了一种将免疫磁分离与免疫磁层析相结合的磁性免疫层析快速检测新方法，使用氯霉素作为

8、检测对象，并与本课题组自制的光学成像分析仪相结合，实现氯霉素残留的快速半定量检测。这些研究工作也将为今后发展免疫层析磁颗粒的磁信号定量检测奠定基础。关键词：磁性纳米粒；免疫层析；氯霉素；快速检测；食品安全II华中科技大学硕士学位论文AbstractAlongwiththefrequentfoodsafe