层析技术在中药分析中的应用

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1、层析技术在中药分析中的应用析技术的应用与发展，对丁•植物各类化学成分的分离鉴定工作起到重人的推动作用。如中药丹参的化学成分在30年代仅从中分离到3种脂溶性色索，分别称为丹参酮I、1【、III。但以后进一步的研究，发现除丹参酮I为纯品外，II、III、均为混合结品。此后通过各种层析方法，迄今已发现15种单体（其中有4种为我国首次发现）。目前新的层析技术不断发展，随着层析理论和电子学、光学、计算机等技术的应用，层析技术已日趋完善。一.层析法的基本原理：层析过程是基丁-样品纽分在互不相溶的两“相”溶剂之间的分配系数之差（

2、分配层析），组分对吸附剂吸附能力不同（吸附层析），和寓子交换，分了的大小（排阻层析）而分离。通常又将一般的以流动和为气体的称为气和层析，流动和为液体的称为液和层析。吸附层析法（AdsorplionChromatography）（一）吸附剂、溶剂与被分离物性质的关系：液一固吸附层析是运用较多的一种方法，特别适用于很多中等分子量的样品（分子量小于I,000的低挥发性样品）的分离，尤其是脂溶性成分一一般不适用于高分子暈样品如蛋白质、多糖或离子型亲水住化合物等的分离。吸附层析的分离效果，决定于吸附剂、溶剂和被分离化合物的性

3、质这三个因索。1.吸附剂：常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、活性炭、硅酸镁、聚酰胺、硅藻土等。（1）硅胶：层析用硅胶为一多孔性物质，分子中具有硅氧烷的交链结构，同时在颗粒表而乂有很多硅醇基。硅胶吸附作用的强弱与硅醇基的含量多少有关。硅醇基能够通过氢键的形成而吸附水分，因此硅胶的吸附力随吸若的水分増加而降低。若吸水罐超过17%，吸附力极弱不能用作为吸附剂，但可作为分配层析中的支持剂。对硅胶的活化，当硅胶加热至100〜110°C时，硅胶表面因氮键所吸附的水分即能被除去。当温度升高至500°C时，硅胶农面的硅醇基也能脱水缩台转

4、变为硅氧烷键，从而丧失了因氢键吸附水分的活往，就不再冇吸附剂的性质，虽用水处理亦不能恢复其吸附活性。所以硅胶的活化不宜在较高温度进行（一般在170cC以上即有少量结合水失去）。硅胶是一种酸性吸附剂，适用于小性或酸性成分的层析。同时硅胶乂是--种弱酸性阳离子交换剂,其农面上的硅醇基能释放弱酸性的氮离子，当遇到较强的碱注化台物，则可因离子交换反应而吸附碱性化合物。（2）氧化铝：氧化铝可能带有碱性（因其中可混有碳酸钠等成分），对于分离一些碱性中草药成分，如生物碱类的分离颇为理想。但是碱性氧化铝不宜用于醛、側、醋、内酯等类

5、型的化介物分离。因为有时碱性氧化铝可与上述成分发生次级反应，如片构化、氧化、消除反应等。除去氧化铝中绚碱性杂质可用水洗至中性，称为屮性氧化铝。屮性氧化铝仍属于碱性吸附剂的范畴，木适用于酸性成分的分离。用稀硝酸或稀盐酸处理氧化铝，不仅可中和氧化铝中含冇的碱性杂质，并可使氧化铝颗粒表面带有N03—•或CI一的阴离子，从而具有离于交换剂的性质，适合于酸性成分的层析，这种氧化铝称为酸性氧化铝。供层析用的氧化铝，用于拄层析的，其粒度要求在100〜160目Z间。粒度大子100目，分离效果差：小于16011,溶浓流速人慢，易使谱

6、带扩散。样品与氧化铝的用虽比，一般在1：20〜50之间层析柱的内径与柱长比例在1：10-20之向。在用溶剂冲洗柱时，流速不宜过快，洗脱液的流速一般以每半〜1小时内流出液体的亳升数与所用吸附剂的重量（克）相等为合适。（3）活性炭：是使用较多的一种非极性吸附剂。一般需要先用稀盐酸洗涤，其次用乙醇洗，再以水洗净，于80°C干燥后即可供层析用。层析用的活性炭，最好选用颗粒活注炭，若为活性炭细粉，则需加入适量硅藻土作为助滤剂一并装柱，以免流速太慢。活性炭主要且于分离水溶性成分，如氨基酸、糖类及某些貳。活性炭的冇为吸附作用，在

7、水溶液屮最强，在冇机溶剂屮则较低弱。故水的洗脱能力绘弱，而有机溶剂则较强。例如以醇水进行洗脱时，则随乙醇浓度的递增而洗脱力增加。活性炭对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物，对大分子化合物的吸附力大于小分子化合物。利用这些吸附性的差别，可将水溶性芳香族物质与脂肪族物质分开，单糖与多糖分开，氨基酸与多肽分开。2.溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大。在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混合溶剂）习惯上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展开剂。洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在

8、用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），贝9洗脱剂的极性亦须相应降低。在柱层操作时，被分离样品在加样时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。溶解样品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以