蜂胶中氯霉素残留量快速检测方法——胶体金免疫层析法.pdf

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1、ICS67.180.10X31中国蜂产品协会团体标准T/CBPAXXXX—2018蜂胶中氯霉素残留量快速检测方法——胶体金免疫层析法Fastdetectionofchloramphenicolresidueinpropolis-Colloidalgoldimmunochromatographicmethod(征求意见稿)2018-XX-XX发布2018-XX-XX实施中国蜂产品协会发布T/CBPAXXXX—2018前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由中国蜂产品协会提出并归口。本标准起草单位：杭州碧于天保健品有限公司、杭州天厨保健品有限公

2、司、南京老山药业股份有限公司、中国蜂产品协会蜂胶专业委员会本标准主要起草人：×××、×××、×××、×××、×××本标准为首次发布。ⅠT/CBPAXXXX—2018蜂胶中氯霉素残留量快速检测方法——胶体金免疫层析法1范围本标准规定了蜂胶中氯霉素（Chloramphenicol，CAP）残留的检测——胶体金免疫层析法的原理、试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、结果判断及表述、结果确证的方法。本标准适用于蜂胶原料、蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留的快速筛查检测。本方法的检出限：蜂胶原料为0.1µg/kg，蜂胶乙醇提取物为0.2µg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的

3、应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18932.19蜂蜜中氯霉素残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法3原理本法为竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。样品中残留的氯霉素，经蜂胶溶解，沉淀、过滤、乙酸乙酯提取，吹干，盐析净化，加氯霉素复溶液反复冲洗残渣，将样液滴加在氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板的加样孔中，利用微孔膜的毛细管作用缓慢向另一端渗移，在移动过程中，样品溶液中的氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，从而抑制了抗体和检

4、测线上特异性结合抗原的结合，未被氯霉素结合的抗体与检测线上的抗原反应，并通过胶体金的颜色而显示红色条带。目测比较板上控制线（C线）和检测线（T线）上红色条带的有无及颜色的相对深浅进行判定。当试样中的氯霉素含量达到或超过本方法检出限时，检测线较控制线显色淡甚至无显色，判定为阳性；反之，当试样中的氯霉素含量在本方法检出限以下或无残留时，检测线与控制线显色一致或偏深，判定为阴性。4试剂和材料4.1.娃哈哈纯净水或相当者4.2.蜂胶溶解液A：取分析纯氢氧化钠5g加水（4.1）90g搅拌溶解混合，冷却后定容到100mL。4.3.蜂胶沉淀剂B：取分析纯高氯酸10mL加水（4

5、.1）40mL混合溶解。4.4.碱化剂C：取分析纯氢氧化钠40g加水（4.1）50g于玻璃烧杯中搅拌溶解混合，冷却后定容到100mL。4.5.氯化钠溶解液：称取5.85g氯化钠加5ml乙醇，用水定容至100mL。4.6.乙酸乙酯，AR4.7.正己烷，AR4.8.氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板4.9.复溶液，氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板中配备4.10.定性滤纸，11cm4.11.塑料离心管，50mL，最小刻度0.5mL；15mL，最小刻度0.5mL4.12.一次性塑料滴管，1mL，3mL1T/CBPAXXXX—20184.13.蒸发皿，90mm5仪器和设备5.1

6、.电子天平：感量0.1g5.2.榨汁机5.3.电吹风机6测定步骤6.1.试样制备取蜂胶原料适量于榨汁机于塑料杯中（榨汁机配件，用于小量粉碎），盖上底盖并拧紧，粉碎30秒取下塑料杯混合一次继续粉碎30秒，如此3～5次，取砂粒状较细的物料用于检测。胶含量大于30%时，需要冷藏2小时再进行粉碎。6.2.样品处理向50mL塑料离心管中加入8mL蜂胶溶解液A（4.2）和8mL水（4.1），混合均匀，称入蜂胶原料4g（蜂胶乙醇提取物称取3g），拧紧瓶盖，在掌心上轻轻拍打，使用蜂胶溶解5min，加入4mL蜂胶沉淀剂B（4.3），用手不停用力震荡1min，使蜂胶分散。将样液倒入

7、滤纸中过滤于50mL带刻度的塑料离心管中，取全部滤液。用1mL一次性滴管向滤液加入0.25mL碱化剂C（4.4），混合均匀，加入16mL乙酸乙酯，充分振荡1min，静置2～5min使乙酸乙酯分层，用3mL一次性滴管吸出上层液体于90cm蒸发皿中，用电吹风机吹干，加入4mL氯化钠溶解液(4.5)，用3mL一次性滴管反复吹吸溶解液至残留物全部溶解，转入15mL塑料离心管中，加4mL乙酸乙酯，充分振荡1min，静置2～5min使乙酸乙酯分层并澄清，如果没有分层完全，用手指轻拍管壁可促进分层，用3mL一次性滴管吸出上层液体于90mm蒸发皿中，用电吹风机吹干，用1mL一次

8、性滴管加入5滴复溶液（4