两种定量检测d-二聚体方法的探讨

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1、两种定量检测D-二聚体方法的探讨赵玉芬岳金霞(河南省温县人民医院河南温县454850)【摘要】目的探讨两种定量方法检测同一标木D-聚体之间的结果比较。方法分别用胶体金免疫渗透法和全自动血凝仪上使用的免疫比浊法检测180例门诊及住院病人标木。结果免疫比浊法测定结果阳性率高于胶体金免疫滲透法。结论D-二聚体的多种检测方法中，胶体金免疫渗透试验和全自动血凝仪上使用的免疫比浊法都拥有能定量检测、快速、简单、敏感性高等优点，但全自动血凝仪上使用的免疫比浊法相对于胶体金免疫渗透法，易在大多数医院推广使用，有很好的应用前景。【关键词】D-二聚体定量检测胶体金免疫渗透法免疫比浊法【中图分类号】R4

2、46【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)31-0138-02随着心脑血管及其他器官血栓性疾病对人们生命威胁的H益加重，医学界对血栓性疾病的研究越来越深入。D-二聚体是交联的纤维蛋白的降解产物，血浆内D-二聚体浓度能够反映体内继发纤溶水平。当体内发生血栓，如深静脉血栓(DVT)、肺栓塞(PE)和弥散性血管内凝血(DIC)时，纤溶酶被激活，大量交联的纤维蛋白在纤溶酶的作用下分解并释放出D-二聚体，因此血浆中D-二聚体浓度升高［1］。D-二聚体为继发性纤溶之特有代谢物［2］，是确定体内有无血栓形成及继发性纤溶的指标。我实验室用两种方法对D-二聚体进行定量检测比较，一

3、种是在全自动血凝仪使用的免疫比浊法，另一种是在金标斑点定量读数仪上使用的胶体金免疫渗透法，现将结果报告如下。1临床资料与方法1.1一般资料所有标木均来自我院2012年10月-2013年3月门诊及住院病人。其中，男患者120例，女患者60例，年龄为25-85岁，平均55岁。所有标木用0.109mol/L枸橼酸钠真空采血管，采集静脉血2mL，室温条件下3000r/min离心lOmin分离血浆进行检测。1.2方法1.2.1试剂北京利德曼生化股份奋限公司D-二聚体液体双试剂盒;上海奥普生物医药有限公司的D-二聚体金标定量检测试剂盒。1.2.2仪器北京普利生全自动血凝仪；上海奥普金标斑点定量

4、读数仪。1.2.3原理胶体金免疫渗透法原理：待测样品中所含的D-二聚体，能为固相在膜上的D-二聚体抗体特异性地捕获，然后由另一个D-二聚体单抗-胶体金缀合物标记，呈红色斑点，斑点红色强度与样品中D-二聚体浓度呈正比，可用金标斑点定量读数仪读取结果。免疫比浊法原理：根据待测样本中的D-二聚体抗原与试剂中包被有D-二聚体抗体的胶乳颗粒反应形成抗原-抗体复合物，对透过的光线形成散射作用，使透过的光强度减弱，其减弱程度与D-二聚体抗原量成一定的数量关系，光照射到光靶上变成电信号，经过放大和信号处理后，确定被测介质中D-二聚体抗原成分的含量。1.2.4方法用两种方法分别检测180份标本，严格

5、按照仪器以及试剂盒说明书进行操作。1.2.5结果判定按照各自试剂盒说明书给出的参考范围进行判定，大于参考范围为异常标本，小于参考范围为阴性标本。1.3统计学方法统计学处理采用t检验和P值比较。2结果表1180例标本两种方法检测D-二聚体结果分析注：P<0.01由表1可以看出，全自动血凝仪上使用的免疫比浊法阳性率为37.78%,胶体金免疫渗透法阳性率为28.89%。免疫比浊法阳性率高于胶体金免疫渗透法［3］。3讨论D-二聚体的检测是一种对继发性纤溶灵敏度高、特异性强的检验项0,可冇效地标志稳定的纤维蛋白的出现，.其检测对血栓性疾病的诊断及治疗观察具奋重要应用价值［4-5］。D-二聚体

6、是交联纤维蛋白的降解产物，具冇较强的抗原性。检测D-二聚体的方法，建立于1983年，采用免疫学的原理，检测抗原的含量。D-二聚体检测方法主要有胶乳凝集法、胶体金免疫滲透法、酶联免疫吸附试验（EUSA）及免疫比浊法。胶乳凝集法是被检血浆中D-二聚体与包被在胶乳颗粒上的单抗相作用，产生絮状沉淀反应；是一种定性实验，如做半定量测定吋须多次倍比稀释测定费试剂，iL结果重复性差，敏感性较低，且肉眼观察，有主观差异，只能作为筛查试验。ELISA方法采用2个针对D-二聚体的单抗建立以抗原为中心的两种抗体夹心法，并加入辣根过氧化酶的底物以作显色反应；EUSA方法检测D-二聚体线性范围较宽，并iL不

7、受胆红素、血红蛋白、纤维蛋白原、FDP干扰，因此，检测结果更精确，敏感性更高［6】；但是操作步骤复杂、费吋，抗原抗体反应受温度、吋间影响，每次实验需同时做标准曲线，因此需留一批标本同吋测定，不适用于临床病人及吋诊断及治疗的需要，无法满足急诊的需求。胶体金免疫渗透试验使用包被的D-二聚体特异性抗体捕获血浆中的D-二聚体，然后由另一个D-二聚体单抗-胶体金缀合物标记，呈红色斑点，斑点红色强度与样品中D-二聚体浓度呈正比，可用金标斑点定量读数仪读取结果，该法即具有胶乳凝集法