中药植物雌激素对人晶状体上皮细胞雌激素受体表达的影响与信号转导机制研究

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1、中药植物雌激素对人晶状体上皮细胞雌激素受体表达的影响与信号转导机制研宄(广州市番禺区大石街社区卫生服务屮心广州440113)【摘要】目的：研究屮药植物雌激素对人晶状体上皮细胞(HLEC)雌激素受体(ER)表达的影响并分析其信号转导机制。方法：应用屮药植物雌激素蜕皮甾酮(ECR)与人晶状体上皮细胞共同孵育，采用雌二醇(E2)作为本次研究阳性对照，在应用过氧化氢对人晶状体上皮细胞形成氧化损伤，应用流式细胞术(FCM)检测雌激素受体蛋白其表达受不同浓度(10-6、10-7、10-8mol/L)蜕皮甾酮的影响。结果:随着蜕皮甾酮浓度上升，其ERα、ERβ蛋白逐

2、渐上升，表现出明显的浓度依赖相关。结论：屮药植物雌激素蜕皮留酮可能机制是上调由过氧化氢处理的人晶状体上皮细胞其雌激素受体表达继而发挥抗氧化损伤机制，从而达到防治年龄相关性白内障作用。【关键词】屮药植物雌激素；人晶状体上皮细胞【屮图分类号】R776.1【文献标识码】C【文章编号】1004-6194(2015)02-0398-02【Abstract】Objective:tostudythetraditionalChinesemedicineplantestrogensinhumanlensepithelialcells(HLEC)theinfluenceofestrogenre

3、ceptor(ER)expressionandanalyzeitssignaltransductionmechanism.Methods:thetraditionalChinesemedicineplantestrogenmoltingsteroneandhumanlensepithelialcells(ECR)commonincubation,theestradiol(E2)aspositivecontrol,thestudyonapplicationofhydrogenperoxideinhumanlensepithelialcellsformoxidativedama

4、ge,flowcytometry(FCM)isappliedtodetecttheestrogenreceptorproteinexpressionbydifferentconcentrations(10-6,10-7,10-8mol/L)moltingsteroneinfluence.Results:AndwiththisriseofsteroneanditsERalpha,betaproteinERgraduallyrise,showingobviousconcentrationdependent.Conclusion:Chinesemedicineplantestro

5、genmoltingsteronepossiblemechanismisraisedbyhydrogenperoxidetreatmenthumanlensepithelialcellsoftheestrogenreceptorexpressionandthenplayagainstoxidativedamagemechanism,soastoachievethepreventionandtreatmentofage-relatedcataract.【keywords^traditionalChinesemedicineplantestrogen;Humanlensepit

6、helialcells作为从中老年开始进展发生的晶状体混浊，老年性白内障随着年龄增加其患病率也显著上升［-2］。蜕皮甾酮(ECR)是中成药牛膝的有效单体成分，本次研宄从雌激素受体相关角度对蜕皮逛酮对氧化应激状态下人晶状体上皮细胞的影响及其信号转导机制作出讨论，探讨老年白内障发病机制及防治办法。1材料与方法1.1使用仪器流式细胞仪、二氧化碳培养箱、超低温冰箱、微量移液器、倒置相差显微镜、超净工作台。1.2主要试剂雌二醇(E2)粉末，纯度97%;蜕皮甾酮(ECR)粉末，纯度96.3%,;胰蛋白酶，DMEM培养基干粉；兔抗人ERα、ERβ多克隆抗体，异硫氮酸

7、荧光素(HTC)标记的羊抗兔抗体。1.3实验方法1.3.1人晶状体上皮细胞培养将冷冻保存去冻存管内的细胞取出后置入37摄氏度水内，使用十倍体积以上的培养液将溶解的细胞悬液予以稀释、离心、上清液去除，并反复洗涤三次。在培养瓶中以每毫升5*105个计量接种，于30摄氏度5%CO2培养箱中培养。传代培养工作在细胞生长融合后开始。1.3.2溶液配制雌二醇溶液配制：取雌二醇粉末0.0136克，在五毫升无水乙醇中溶解，配成102mol/L的储存液，于使用前进行稀释。反应缓冲液配制：称取牛血清白蛋白2.5克，在200毫升磷酸盐缓