资源描述：
《二仙汤及其组方中药对幼年大鼠肾上腺雌激素受体表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、二仙汤及其组方中药对幼年大鼠肾上腺雌激素受体表达的影响论文.freelechanismofEr-xianDecoctionanditsponentherbsontheexpressionofextrogenreceptor(ER)inadrenaldevelopmentrats.MethodsFifty-fourdevelopmentfemaleSDratslydividedintoninegroups：normalcontrolgroup(A),positivecontrolgroup(B),
2、Er-xianDecoctiongroup(C),HerbaEpimediigroup(D),RhizomaCurculiginisgroup(E),RadixMorindaeOfficinalisgroup(F),RadixAngelicaeSinensisgroup(G),CortexPhellodendrigroup(H),RhizomaAnemarrhenaegroup(I).Aftertheratsinistratedforsixdays,serumeasuretestosterone
3、(T).Bilateraladrenalglandbeddedbyparaffin.Meanopticaldensity(MOD)munohistochemicalmethodandimageanalyzingsystem.ResultsTheadrenalcoefficientainlyobservedinthecytoplasmofzonaglomerulosaandzonafasciculate.MODingroupCainlyobservedinnucleusofzonaglomerul
4、osaandzonafasciculate.MODingroupC,D,EandIingShen(HerbaEpimedii,RhizomaCurculiginis)andnourishingYin(RhizomaAnemarrhenae)playaphytoestrogenrolebyinfluencingtheexpressionofERαandERβintheadrenalcortex.KeyL药液;二仙汤按淫羊藿、仙茅、巴戟天∶当归、黄柏、知母为3∶2配制成原药材含量1g/mL药液;阳性
5、药物为己烯雌酚(批号20080104),0.5mg×100片/瓶,合肥久联制药有限公司生产。以上药物均购自北京中医药大学东直门医院。1.3试剂一抗：ERα(MC-20)和ERβ(H-150)为SantaCruz公司产品;过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒(SP-9001)购自北京中杉金桥生物技术有限公司;血清睾酮(T)检测试剂盒购自北京华英生物技术研究所。2实验方法2.1分组与给药将实验动物按体重均衡和随机的原则分为9组：正常对照组、阳性对照组、二仙汤组以及6个单味药组。实验动物适应性饲养3d
6、后开始实验。正常对照组给予等体积蒸馏水;阳性对照组按0.18mg/(kg·d)给予己烯雌酚;二仙汤组按7.5g/(kg·d)给药;淫羊藿、仙茅、巴戟天组按1.5g/(kg·d)给药;当归、黄柏和知母组按1.0g/(kg·d)给药。灌胃分早、晚2次进行,给药均持续6d。2.2动物取材与血清提取给药6d,处死前禁食12h。用10%水合氯醛按4mL/kg腹腔注射麻醉,沿大鼠腹正中线打开腹腔,自腹主动脉取血,经室温静置2h后,3000r/min离心10min,取其上清液,分别保存于EP管中,-20℃保存
7、备用。将肾上腺与周围组织完全剥离后取出,称重,用中性甲醛固定后制成石蜡切片。2.3血清睾酮的测定具体步骤参照所购试剂盒说明书。2.4免疫组织化学染色步骤石蜡切片脱蜡至水,微波修复抗原10min;入3%过氧化氢室温孵育30min;正常山羊血清封闭液室温孵育20min,倾去,分别用兔抗大鼠ERα或ERβ抗体(1∶150,SantaCruz)孵育切片(4℃,过夜);羊抗兔二抗37℃孵育30min,辣根酶标记链霉卵白素工作液37℃孵育30min,DAB染色。每步骤间用0.O1mol/LPBS充分洗涤,常
8、规脱水,透明,封片,光镜下观察,摄片。染成棕黄色颗粒者为阳性。阴性对照采用PBS代替一抗孵育切片。2.5图像分析采用通用医学图像分析仪,光镜下观察各组染色结果,用NIS-ElementsBasicResearch数据分析软件分析相应抗体的表达量,每组取6张切片,每张切片取5个视野,计算每视野阳性染色平均光密度值(MeanOpticalDensity,MOD)。3统计学方法所有统计资料用—(—统)±s表示,统计学处理采用SPSS11.5软件,单因素方差分析,P0.05为差异有统计学意义。4结果4.
