维拉帕米和生脉注射液对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用论文

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1、维拉帕米和生脉注射液对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用论文山峰何俊峰宋暖刘淑红李堃王静王秋波【摘要】目的观察维拉帕米和生脉注射液对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法将40只大鼠分为假手术组（A组）、缺血再灌注组（B组）、维拉帕米组（C组）和生脉注射液组（D组），每组10只。A组开腹后再关腹；B组开腹后夹闭左肝蒂30min，再关腹；C组在开腹前静脉注射维拉帕米，开腹夹闭左肝蒂30min，再关腹；D组在开腹前3d每天经腹腔注射生脉注射液，开腹夹闭左肝蒂30min，再关腹。各组均在关腹48h后再开腹，每只大鼠取缺血肝组织检测查丙二醛（MDA）、热休克蛋

2、白70（HSP70）的水平.freelilandShengmaiinjectiononischemia-reperfusioninjuryinratliver.MethodsFortyhealthyfemaleDA），1瓶用40g/L的甲醛溶液固定以备制作病理切片；由腹主动脉取血，分离血清检测TNF-α、ALT和AST。维拉帕米由上海禾丰制药有限公司生产，批号为3E12002；生脉注射液由常熟雷允上制药有限公司生产，批号为0406031。1.3观察指标的测定1.3.1ALT、AST用全自动生化分析仪测定。1.3.2TNF-α采用顺序饱和液相竞争放射免

3、疫分析法检测，放射免疫分析试剂盒为北京中国原子能科学研究院产品。1.3.3MDA取缺血肝组织匀浆，用硫代巴比妥酸法检测MDA的含量，试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。1.3.4HSP70用DA结果比较B、C、D组ALT、AST、TNF-α及MDA测定结果与A组比较均有显著性差异（F=5.10～53.01，q=1.38～17.58，P0.05）；C、D两组ALT、AST、TNF-α及MDA含量均低于B组，差异具有显著性（q=2.89～10.08，P0.05），而C、D两组以上各指标差异除ALT比较有显著性（q=2.97，P0.05）外，其他指标比较差

4、异无显著性（P0.05）。见表1。2.3各组HSP70表达比较C、D两组HSP70的表达明显少于B组，而C组HSP70的表达略少于D组；C、D两组肝细胞肿胀、坏死程度均较B组轻。各组HSP70的带宽和颜色深浅均不同，A组的色带最窄、颜色最淡，提示有微量的HSP70表达；B组的色带最宽、颜色最浓，提示HSP70的表达量最多；而C组和D组的色带较窄、颜色较浓，介于A、B两组之间，与B组比较有明显区别；C组和D组比较，C组的HSP70的表达又略弱于D组。2.4各组大鼠肝脏组织的病理改变A组肝组织形态正常；B组大量肝细胞明显肿胀，中央静脉周围肝细胞大量坏死；

5、C组和D组肝细胞轻度肿胀，中央静脉周围肝细胞呈小灶状或小片状坏死，两组之间无明显区别，而与B组比较则有较明显区别。表1各组ALT、AST、TNF-α、MDA结果比较3讨论肝脏缺血再灌注损伤是肝脏外科疾病中常见的病理生理过程，在休克的复苏、严重的肝外伤、肝门阻断的肝切除以及肝移植等过程中均不可避免地出现肝脏的缺血再灌注损伤，而它造成的组织损伤是影响上述疾病治疗效果的重要原因之一。因此，如何减轻肝脏缺血再灌注损伤是肝脏外科研究热点。肝脏缺血再灌注损伤的发病机制比较复杂，近些年对这方面的研究比较多，其中最主要的发病机制就是细胞内钙超载和氧自由基生成增多［1

6、~3］。肝脏缺血再灌注时肝细胞Na+-K+-ATP酶活性降低，膜通透性增加，ATP产生减少，致大量Ca2+进入细胞内，Ca2+激活细胞膜上的蛋白酶和磷脂酶，破坏细胞膜的完整性，并且干扰线粒体的氧化磷酸化，引起严重的能量代谢障碍，导致肝细胞不可逆性损害。以下途径造成氧自由基的增多：①肝脏缺血再灌注过程中ATP分解代谢增加，分解产物次黄嘌呤大量堆积，产生大量氧自由基；②低氧也使内源性超氧化物歧化酶（SOD）失活或耗尽，SOD是体内作用强大的抗氧化剂；③缺血刺激激活Ca2+依赖蛋白酶，促进细胞内有害的黄嘌呤氧化酶产生，后者利用胞内分子氧产生大量的氧自由基；

7、④细胞缺血、低氧也促进线粒体产生大量氧自由基［4］。氧自由基的大量产生损伤肝细胞膜的完整性，直接损伤肝细胞；还引起血小板、粒细胞在微血管中黏附、聚集，造成微循环障碍［5］；氧自由基还可直接氧化肝实质细胞核内DNA双链结构，引起DNA突变而造成肝脏结构和功能的损伤［6］。本实验以维拉帕米和生脉注射液为研究对象，观察这两种药物对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。维拉帕米是十分有效的钙离子阻滞剂，NAUTA等［7］最早将其应用于大鼠肝缺血后的再灌注损伤保护，发现维拉帕米在肝脏缺血前给药可明显减轻再灌注的损伤程度。在本实验中，维拉帕米组的ALT、AST、TNF-

8、α、MDA等指标均低于缺血再灌注组，有显著性差异，HSP70的表达少于缺血再灌注组，组织病理亦显示肝细胞肿胀