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时间:2018-11-30
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1、瘦素受体在实验性多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达及其意义【摘要】目的研究来曲唑诱导建立多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型中卵巢组织瘦素受体(ObR)及其mRNA的表达,探讨卵巢ObR变化与PCOS发病机制的关系。方法6周龄清洁级雌性SD大鼠45只,分为正常组、溶剂组和来曲唑组,各15只。正常组每日自由摄取食物和水;溶剂组每日给予1%羟甲基纤维素水溶液2mL/kg灌胃;来曲唑组以来曲唑0.5mg/kg灌胃。观察大鼠体质量、动情周期、卵巢质量及其形态学改变,测定血清黄体生成素(LH)、睾酮(T)、胰岛素(INS)、瘦素(LEP)及血糖
2、(FG)水平,采用免疫组织化学和RealTimeRTPCR方法检测大鼠卵巢中ObR及其mRNA的相对表达,并对3组的各指标进行比较。结果来曲唑组大鼠体质量和卵巢质量指数升高,动情周期消失,卵巢体积增大,白膜增厚,HE染色可见较多囊状扩张的卵泡且黄体数量明显下降,血清T、LH、INS、LEP水平明显升高(P<0.05);卵巢ObR及其mRNA表达明显增强(P<0.05)。结论来曲唑诱导建立的PCOS动物模型临床表现与人类似;卵巢中ObR表达上调,可能是导致PCOS患者不排卵、生育力下降的原因之一。【关键词】多囊卵
3、巢综合征;卵巢;瘦素;受体,肽;疾病模型,动物多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndrome,PCOS)是生育年龄妇女常见的内分泌紊乱性疾病,以卵巢的功能紊乱为特征,常表现为不孕和肥胖,但其发病原因目前尚无定论。瘦素(leptin,LEP)是肥胖基因(ob基因)的表达产物,近年来的研究认为,LEP是营养与生殖之间的代谢信号,它在生殖方面有许多重要的调节作用[12]。研究还显示,LEP存在于卵泡液中,且LEP受体(ObR)在人卵巢中几种不同的细胞上也有表达,表明LEP能够对性腺行使直接的作用[3]。笔者通过研究PC
4、OS大鼠卵巢中ObR及其mRNA的表达情况,探讨其与PCOS发病机制的关系,现报告如下。1材料和方法1.1PCOS动物模型6周龄清洁级雌性SD大鼠,购自中国科学院上海实验动物中心[许可证号:SCXX(沪)20070005],平均体质量180g,二级动物房饲养,恒温22℃,光照12h、黑暗12h交替,自由摄取食物和水。每日定时作阴道涂片检查,选择动情周期4~5d,连续2个正常动情周期的大鼠即开始用于实验,共选出45只,分为正常组、溶剂组和来曲唑组,各15只。来曲唑组每日给予溶解在1%羟甲基纤维素水溶液(CMC)2mL/kg的来曲唑
5、(芙瑞,江苏恒瑞医药股份有限公司)0.5mg/kg灌胃,连续21d[45];正常组每日自由摄取食物和水;溶剂组每日给予CMC2mL/kg灌胃。1.2大鼠体质量及动情周期每日同一时间称量大鼠体质量,同时进行阴道脱落细胞涂片,瑞氏染色后显微镜下观察细胞形态的变化,确定大鼠动情周期的情况。1.3大鼠血清中各项指标末次给来曲唑24h后,禁食8h,对所有大鼠进行下腔静脉取血,采用放射免疫分析法测定大鼠血清黄体生成素(LH)、睾酮(T)及胰岛素(INS)、LEP,试剂盒购自天津市协和医药科技有限公司,批内和批间变异系数分别<10%和&l
6、t;15%。血糖(FG)测定采用葡萄糖氧化酶法,计算胰岛素敏感指数(HomaIR):HomaIR=FG×FINS/22.51.4卵巢标本采集及处理腹腔注射水合氯醛(0.3mL/100mg)麻醉,打开腹腔,用去RNA酶处理过的机械取出双侧卵巢,去除表面脂肪组织并称质量,一侧用10%中性福尔马林固定后石蜡包埋,留作光镜下(HE染色)观察卵巢形态学改变和免疫组织化学实验;另一侧存于-80℃冰箱,留作PCR检测。1.5卵巢中ObR表达常规石蜡包埋,连续冠状切片,厚4μm,共3套,分别用于HE染色、免疫组织化学染色及其对照试验。按E
7、livision免疫组织化学方法进行操作,一抗为羊抗兔LEP受体抗体1∶100(北京中杉金桥生物技术有限公司),25℃过午;二抗50μL为羊抗兔(福州迈新生物技术开发有限公司)30min,DAB显色3~5min,苏木素复染1min。结果判定参照 2结果2.1各组大鼠体质量和卵巢质量比较给药前3组大鼠体质量比较,差别无统计学意义(P>0.05);模型建立21d后,来曲唑组的大鼠体质量和卵巢质量指数均明显升高,与正常组及溶剂组比较,差别均有统计学意义(P<0.05,表1)。表1模型建立后大鼠体质量和卵巢质量指数的比较卵巢质
8、量指数=卵巢质量/大鼠体质量×100.与正常组比较,▲:P<0.05.2.2大鼠动情周期正常组和溶剂组阴道脱落细胞变化符合正常大鼠动情周期,来曲唑组在给药第5天起,陆续出现动情周期消失,且均处动情间期时相,即仅见大量白细胞,偶见
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