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1、外源性ATP对大鼠移植胰腺的作用及机制论文【关键词】胰十二指肠移植；三磷酸腺苷；细胞凋亡；细胞胀亡ProtectiveeffectofexogenousATPontransplantedpancreasinratsanditsmechanism【Abstract】AIM:Tostudytheprotectiveeffectofexogenousadenosinetriphosphate(ATP)ontransplantedpancreasinratsanditsmechanism.METHODS:Th
2、eallogeneicmaleSDratmodelsofheterotopicininbothgroups.Bloodsugar，plasmaconcentrationsofamylaseandlipaseinedandhistologicalobservationedat0,1,6and12hafterreperfusion.TheconcentrationofATPinpancreatictissueined.Thepercentagesofnormal,apoptoticandoncoticce
3、llseasured.RESULTS:LightmicroscopicobservationshoorphologicalchangesofpancreasinATPgroupuchmilderthanthoseincontrolgroup.Thebloodsugarconcent,plasmaconcentrationsofamylaseandlipaseylase,P0.01).TissueconcentrationofATPinATPgroupepointsafterreperfusion(0,
4、1,6h,P0.01;12h,.freelechanismoftheprotectiveeffectmaybeliesinthatATPcandecreasethepercentageofoncoticcells.【Keyin后行移植手术，检测再灌注0,1,6,12h时血糖、脂肪酶、淀粉酶含量，同时检查胰腺组织病理学变化，ATP含量及凋亡、胀亡细胞百分数.结果：ATP组胰腺组织结构损伤明显轻于对照组，ATP6,12h组血糖、血清淀粉酶、脂肪酶含量明显低于同时间点对照组(血糖，脂肪酶.freelg/kg
5、一次注入链脲霉素(美国Sigma公司)制备非空腹血糖19.4mmol/L的糖尿病模型.实验分为2组：对照组，供体胰十二指肠单纯用4℃肝素平衡盐液（150ku/L,15~20mL)灌注并保存60min后行移植手术；ATP组，供体胰十二指肠用4℃肝素平衡盐液添加ATP（5mmol/L,15～20mL）进行灌注并保存60min后行移植手术.两组按移植后再灌注时间各分为再灌注0,1,6,12h亚组（每亚组12只大鼠）.1.2方法采用全胰十二指肠移植模型，供体胰十二指肠根据分组分别用4℃肝素平衡盐液和添加了AT
6、P的肝素平衡盐液灌注并保存60min.切除受体左肾,将供体带腹腔动脉和肠系膜上动脉的腹主动脉段与受体腹主动脉端侧吻合，供体门静脉与受体左肾静脉行端端吻合，供体的十二指肠近端关闭，远端与受体Treitz韧带下2cm空肠作端侧吻合.分别于设计时间点经下腔静脉采血后处死动物并切取移植胰腺行各项检查.血糖测定采用美国强生血糖仪，淀粉酶、脂肪酶测定采用日立7600010型全自动生化仪.切取部分胰腺标本制成石蜡切片后行HE染色，光镜下观察胰腺组织病理学改变.切取胰腺组织约0.5cm×0.5cm×0.5cm，应用岛
7、津SCL10AVP高效液相色谱仪以反相高效液相色谱法测定胰腺组织ATP含量.取胰腺组织1g，生理盐水洗净，剪碎，振荡后300目筛网过滤，收集细胞制成细胞悬液，调整细胞密度至1×109个/L，加标记有异硫氰酸荧光素的联结素V(AnnexinVFITC，上海晶美生物工程有限公司)与碘化丙锭(PI，武汉博士德生物工程有限公司)，混匀双染色.避光冰浴10min，使用流式细胞仪上机检测各类细胞百分数.结果判断：正常活细胞不着色（AnnexinV-,PI-）；胀亡细胞能与AnnexinV,PI结合，呈强绿色和红色
8、荧光（AnnexinV＋,PI＋）；凋亡细胞不与PI结合但与AnnexinV结合，显示绿色荧光（AnnexinV＋,PI-）.统计学处理：数据以x±s表示，采用t检验及相关分析，P0.05为有统计学差异.2结果2.1组织学变化ATP组再灌注0h时胰腺组织光镜检查未见明显异常，再灌注1h时胰腺组织结构改变轻微，腺泡轮廓清晰，局部有胰腺小叶间隙增宽，间质无炎性细胞浸润及外渗，6h时胰腺组织光镜下仍可保持基本正常结构，仅有小叶间隙水肿，少量炎性细胞浸润（图1A
