ly294002对脊髓损伤后胶质瘢痕形成影响

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1、1万方数据2万方数据目录英文缩略词表……………………………………………………………1中文摘要……………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………………4前言………………………………………………………………………6正文第一部分实验材料……………………………………………………………8实验方法……………………………………………………………10实验结果……………………………………………………………17实验讨论……………………………………………………………20实验结论……………

2、………………………………………………22第二部分实验材料……………………………………………………………23实验方法……………………………………………………………25实验结果……………………………………………………………30实验讨论……………………………………………………………32实验结论……………………………………………………………37全文结论……………………………………………………………………38参考文献……………………………………………………………………39致谢………………………………………………………………

3、……43文献综述……………………………………………………………………443万方数据英文缩略词表PI3Kphosphoinositide3-kinase磷脂酰肌醇3-激酶 PKBproteinkinaseB蛋白激酶B SCISpinalcordinjury脊髓损伤 ASAstrocyte星形胶质细胞 CSPGsChondroitinsulfateproteoglycans硫酸软骨素蛋白多糖 TGF-β1Transforminggrowthfactor-β1转化生长因子-β1 CNSCentralnervoussys

4、tem中枢神经系统 BBBBasso-BeattleBresnahanlocomotorRatingscaleBBB评分 LY294002LY294002[2-(4-morpholinyl)-8-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one] 2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并毗喃-4-酮PBSPhosphatebufferedsolution磷酸盐缓冲液 GFAPGlialfibrillaryacidicprotein质纤维酸性蛋白 HEHematoxylinandeosin苏木素和伊红

5、DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜 EDTAEthylenediaminetetraaceticacidsodium乙二胺四乙酸二钠 BSAbovinefibroblastgrowthfactor牛血清白蛋白 FBSfetalbovineserum胎牛血清 HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶 NF-κBnuclearfactor-κB核转录因子-κB PCNAproliferatingcellnuclearantigen增殖细胞核抗原 TBStris-buffered

6、salineTris缓冲盐溶液1万方数据LY294002对脊髓损伤后胶质瘢痕形成的影响摘要目的：使用PI3K-Akt信号通路的特异性抑制剂LY294002干预体内外脊髓损伤模型，WesternBlot方法检测CSPGs、GFAP表达量，探讨LY294002对脊髓损伤后胶质瘢痕形成的影响。方法：（1）将60只体重200～250g（200±8g）的SD大鼠，雌雄不限，随机分为3组，每组20只，钳夹法构建SD大鼠T10脊髓损伤模型，A组为假手术组，仅行椎板切除不损伤脊髓,于术后6h内行鞘内注射DMSO；B组为治疗组，于

7、损伤6h内行鞘内注射溶解于DMSO的LY294002；C组为对照组，于损伤6h内行鞘内注射DMSO溶剂，采用BBB评分标准于SCI后1、2、4周分别对各实验组动物进行后肢运动功能评估；（2）分别于损伤后1、2、4周取大鼠脊髓组织，提取蛋白，通过WesternBlot方法检测各实验组CSPGs蛋白表达水平；（3）提取新生1～2d的SD新生大鼠脑组织，利用连续差速传代法培养星形胶质细胞，取免疫组化及免疫荧光鉴定为95%以上的第三代AS细胞用于后续试验。将AS细胞种板后分成4组，A组加入LY294002及完全培养基，B

8、组加入DMSO及完全培养基，C组于TGF-β1诱导后加入含LY294002的培养基，D组TGF-β1诱导后加入DMSO及培养基，倒置显微镜下观察细胞形态并拍片。提取AS细胞蛋白，WesternBlot方法检测各实验组CSPGs及GFAP蛋白水平。结果：（1）体内试验SD大鼠T10脊髓损伤造模成功，病理显示脊髓组织明显充血，神经元变性。手术后，假手术组大鼠后肢BBB评分短时