甲状腺素对早期自然流产细胞滋养细胞MMP2、VEGF的影响

《甲状腺素对早期自然流产细胞滋养细胞MMP2、VEGF的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海市交通大学医学院硕士生论文过程以及胚胎靶细胞的甲状腺素受体水平等个环节的异常均可造成胚胎的甲状腺水平异常，造成绒毛发育异常。若绒毛发育异常，绒毛组织衰退萎缩，不能产生抗免疫排斥的诸多因子，引发母体胎儿界面的免疫排斥反应增高，导致自然流产。本实验通过测定甲状腺素对人早期自然流产绒毛细胞滋养细胞MMP-2，VEGFmRNA水平的影响，探讨甲状腺素对绒毛发育，滋养细胞侵袭力和胎盘血管生成的作用，对人类早期自然流产结局的影响。-2-上海市交通大学医学院硕士生论文甲状腺素对人早期自–然流产细胞滋养细胞MMP-2、VEGF的影响早期自然流产指妊娠3个月以内的自

2、发性流产。胎龄3月内，胚胎的甲状腺功能没有完全发育，胚胎-绒毛单位的生长发育主要依靠母体甲状腺激素。前阶段工作中我们对自然流产患者绒毛细胞上的甲状腺素受体进行分析，结果显示，自然流产患者绒毛细胞甲状腺素非功能性受体TRα2含量上升，而功能性受体TRα1、TRβ1及TRβ2含量降低，认为绒毛中甲状腺激素受体在早期自然流产组表达异常，导致通过传递给绒毛细胞的甲状腺激素水平降低，致使绒毛发育差，从而导致不良妊娠的发生。本实验通过研究甲状腺素对自然流产患者绒毛细胞滋养细胞MMP-2、VEGFmRNA水平的影响，探究甲状腺素对绒毛生长发育的影响。2材料和方法2.

3、1标本来源无菌绒毛组织：选取2010年6月至2011年1月上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科计划生育手术室行人工流产的自然流产患者的绒毛组织6例，所有患者符合以下条件：12周以内的难免流产患者，既往月经周期规律，无生殖系统畸形或肿瘤，无急、慢性生殖器官炎症，无糖尿病、甲状腺功能异常等内分泌病史，夫妇双方染色体正常。同时选取12周以内人工流产终止妊娠的正常妊娠组6例，此次妊娠无腹痛、阴道出血，B超见胚芽、心管搏动，无自然流产，既往无胎儿宫内发育迟缓、无宫内死胎病史和无母体原发内分泌疾病等。两组在年龄、月经周期、甲状腺激素（FT3、FT4、TSH）含量方

4、面，均无显著性差异（P>0.05）（见表1、表2）。两组手术方法均为静脉麻醉下负压吸宫术，将术中所取无菌绒毛用于细胞滋养细胞-3-上海市交通大学医学院硕士生论文的培养，术中同时抽取患者肘静脉血液3ml，测血清游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、血清游离甲状腺素（FT4）和促甲状腺激素（TSH）含量。表1自然流产组和正常组年龄、月经周期比较（x±s）自然流产组正常妊娠组P值例数66年龄(岁)28.50±4.5927.33±4.46P>0.05月经周期(天)30.50±2.3531.17±1.33P>0.05表2自然流产组和正常组静脉血FT3、FT4、TSH比较

5、（x±s）自然流产组正常妊娠组P值例数66TSH（mU/l）1.562±0.4841.603±0.646P>0.05FT3（pmol/l）4.572±0.3324.708±0.469P>0.05FT4（pmol/l）13.128±3.45316.262±3.326P>0.052.1外周血FT3、FT4、TSH测定2.2.1试剂：FT3试剂（拜耳医药保健有限公司），FT4试剂（上海蓝怡科技有限公司），TSH试剂（苏州新波生物有限公司）2.2.2测定方法：患病组及正常组均从肘静脉取空腹血液3ml；取出血液立即放入含促凝剂EDTA的促凝试管中，1000r/m

6、in离心后5分钟，取上清液1ml；取出的上清液马上进行放射免疫法检测FT3、FT4、TSH含量。2.3细胞滋养细胞的原代培养、鉴定2.3.1细胞滋养细胞培养：采用胰酶消化法培养分离培养人绒毛组织的细胞滋养细-4-上海市交通大学医学院硕士生论文胞。材料：DMEM高糖培养液（4500mg/L）购自美国Gibco公司，胰蛋白酶购自美国Gibco公司，II型胶原酶购自美国SIGMA公司；基质胶（BasementMembraneMatrix）购自BD公司；左甲状腺素钠，化学名称为4-氧-(4-羟基-3,5-二碘苯基)-3,5-二碘-L-酪氨酸钠，采用德国默克药业

7、生产的优甲乐，50ug/粒，研磨溶解，通过无菌过滤制成无菌溶液；Trizol购自invitrogen公司；PBS液自配，所有液体均经高压消毒或过滤除菌。培养步骤：人工流产术中采集的无菌绒毛组织在超净台工作台中，PBS漂洗三次，去除血污，用眼科剪剪去蜕膜等其他物质，将绒毛组织充分剪碎至糊状。用0.12%的胰酶在37。C震荡消化30分钟，加入胎牛血清终止消化，100目筛网过滤。1500rpm离心15分钟。0.4%II型胶原酶37。C震荡消化15分钟，调整细胞量为8×108个/L。培养皿放置于4。C，将基质胶均匀涂布于培养皿中，约50ul/cm2，，然后培养

8、皿放置于37。C，30分钟。将细胞接种于培养皿中，加入含15%胎牛血清DMEM培养液。当原代培