妊娠早期单核细胞异质性分析与滋养层细胞系htr8svneo对其影响的研究

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1、妊娠早期单核细胞异质性分析及滋养层细胞系HTR8．SVneo细胞对其影响的研究妊娠早期单核细胞异质性分析及滋养层细胞系HTR8-SVneo对其影响的研究专业：免疫学研究生：张韵导师：曲迅教授中文摘要母体对植入胚胎免疫耐受的同时抵抗病原体(病毒，细菌)感染是成功妊娠的关键。机体维持母胎间的免疫耐受并有效抵御病原体感染包含大量复杂、彼此相关联的事件，受到严格的时空调控。母胎间免疫耐受的不足往往导致病理性妊娠如先兆子痫、习惯性流产等疾病的发生：然而过度耐受又会导致无法有效抵御病原体感染，因此维持理想的耐受．抗感染平衡对于妊娠的顺利进行

2、至关重要。已知母胎界面存在的众多免疫细胞参与母胎免疫耐受及抗感染，单核细胞作为该部位第二大免疫细胞群体在此过程中发挥重要作用。单核细胞是一类具有高度异质性的细胞群体，主要分为CDl4+CDl6‘单核亚群以及CDl4+CDl6+单核亚群。已有的报道指出，CDl4+CDl6十单核亚群具有高度的免疫抑制功能有利于维持局部免疫耐受；与之相反，CDl4+CDl6。单核亚群则能有效启动机体的免疫应答从而抵御潜在的外部感染。因此，对妊娠过程中母体外周血以及蜕膜组织局部单核异质性的研究有助于更好的理解病理性妊娠并对相关疾病的防治提供新的思路。滋

3、养层作为胚胎最初与母体接触的组织，在胚胎与母体子宫内膜间有效的交流过程中必不可少，因此滋养层与母体免疫系统间的相互作用备受关注。然而，有关滋养层细胞对蜕膜局部单核细胞作用的相关研究尚未见报道。基于此，本研究利用滋养层细胞系HTR8-SVeno细胞作为滋养层细胞模型，观察分析体外模拟妊娠早期条件下HTR8-SVeno细胞对于人外周血来源单核细胞各亚群分布的调节，以及模拟妊娠早期病原体感染(LPS)条件下HTR8-SVeno细胞对于单核细胞各亚群再分布的调节。山东省医学科学院硕士学位论文1．目的观察正常早孕人外周血以及蜕膜组织局部单

4、核细胞各亚群分布比例。体外模拟母胎界面微环境，检测滋养层细胞系HTR8．SVneo细胞对单核细胞各亚群分布的调控及病原体感染(LPS)条件下HTR8-SVeno细胞对于单核细胞各亚群再分布的调节。揭示胚胎组织参与调控母胎间免疫耐受，为滋养层与母胎间免疫微环境的关系提供理论依据，从而有利于病理性妊娠发病与治疗的认识。2．方法2．1流式细胞术检测年龄为20,-,35岁的早孕妇女(19例)与健康未孕者(13例)外周单核细胞CDl4+CDl6。亚群以及CDl4+CDl矿亚群分布比例；2．2流式细胞术检测健康妇女妊娠早期蜕膜组织(6例)单

5、核细胞单核细胞CDl4+CDl6‘亚群以及CDl4+CDl6+亚群分布比例；2．3流式细胞术检测体外培养时间(4h、8h、12h)对人外周血单核细胞CDl4+CDl6。亚群以及CDl4+CDl6+亚群分布的影响；2．4流式细胞术检测HTR8．SVneo滋养细胞与单核细胞等比例共培养4h、8h、12h对单核细胞CDl4+CDl6。亚群以及CDl4+CDl6+亚群分布的影响；2．5流式细胞术检测LPS(100ng／mL)对单核细胞(单独培养组)各亚群分布的影响、对HTR8．SVneo细胞诱导的单核细胞(单核细胞与HTR8共培养组)各

6、亚群分布的影响。3．结果3．1健康未孕者外周血单核细胞以CDl4+CDl6。亚群为主要群体，其阳性频率为(88．34+3．73)％，CDl4+CDl6十亚群仅为(11．504-3．7)％；与健康未孕女性外周血比较，早孕妇女外周血单核细胞CDl4+CDl6‘亚群显著上升，(阳性频率为(91．794-7．59)％，P<0．01)，CDl4+CDl6+亚群单核细胞亚群比例显著降低(阳性频率为(8．214-4．73)％，P<0．05)。3．2妊娠早期，CDl4+CDl6+细胞亚群是蜕膜组织中CDl4+细胞的主要亚群，其阳性频率为(69．

7、13+7．73)％，而早孕妇女外周血中CDl4+CDl6+细胞亚群仅为(8．214-4．73)％，二者比较差异有统计学意义(尺0．05)：CDl4+CDl6’亚群约占蜕膜组织中CDl4+细胞的(32．5+5．65)％，显著低于早孕妇女外2妊娠早期单核细胞异质性分析及滋养层细胞系HTR8．SVneo细胞对其影响的研究周血的阳性频率(91．7蛀7．59)％，P<0．05。3．3利用磁分选技术获取的人外周血单核细胞在体外分别培养4h、8h、12h后，CDl4+CDl6+亚群分别占总单核细胞的(8．31士'-0．22)％、(8．284-

8、0．34)％、(8．26-J：0．12)％，三者比较差异无统计学意义。由此可见，在12小时离体培养过程中单核细胞各亚群比例无显著变化。3．4单独培养单核细胞经LPS(100ng／mL)刺激1211后，CDl4+CDl6+单核细胞亚群比例与无LPS刺激组比较无显著