大孔树脂分离丹参酚酸b的筛选研究

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1、大孔树脂分离丹参酚酸B的筛选研究【关键词】丹酚酸B；,,高效液相色谱法；,,大孔树脂　　摘要：目的筛选分离丹酚酸B的最佳大孔树脂。方法以高效液相色谱（HPLC）测得丹酚酸B含量为指标，对10种不同型号的树脂分别进行吸附与解吸性能考察。结果大孔树脂的吸附与解吸性能有较大差异，HPD450，D101，X5，HPD800，D4020，HPD700对丹酚酸B均有较强的吸附与可洗脱性，D101为最佳吸附树脂。结论大孔树脂分离丹酚酸B方法是可行的。　　关键词：丹酚酸B；高效液相色谱法；大孔树脂　　丹酚酸（salvianolicacids）是中药丹参SalviamiliiorrhizaBge.中的主要活性成

2、分，具有抗动脉粥样硬化、保护心肌细胞、防心脑缺血损伤、抗血小板凝聚、抗肝纤维化、改善记忆、抗肿瘤等作用〔1，2〕。丹参药材中水溶性成分提取，多以丹参素或原儿茶醛为指标〔3，4〕，但两者在药材中的含量均较低，只有丹酚酸B为丹酚酸中最主要的有效成分〔5〕。目前对丹酚酸分离多采用醋酸乙酯萃取法，但该种方法溶剂消耗大，并存在溶剂残留。大孔树脂吸附是目前用于许多有效成分分离的良好方法，成本低、效率高，但至今尚无筛选大孔树脂分离丹酚酸B的报道。本人就大孔树脂对丹参酚酸B的吸附与解吸性能进行综合考察，以期找到一种分离丹参酚酸B的最佳大孔树脂。　　1材料与仪器　　1.1材料与试药　　丹参药材，湖北产，60℃减

3、压干燥后，粉碎过40目筛。大孔树脂：HPD450（弱极性）、HPD600（极性）、HPD700（非极性）、HPD800（中极性）（河北沧州宝恩化工有限公司）、D101（非极性）（天津海光化工有限公司）、D4020（非极性）、AB8（弱极性）、X5（非极性）、S-8（极性）、NKA9（极性）（南开大学化工厂）。乙腈为色谱纯；甲醇、甲酸为分析醇；丹酚酸B对照品（中国药检所，批号20031108）。　　1.2仪器分离色谱柱（20mm×500mm）；Agilent1100高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱KromasilC18(250mm×4.6mm)/5μm。　　2方法　　2.1丹参提取液的制备丹参

4、药材粉，加10倍量70%乙醇50℃浸提1h，过滤后滤渣再加8倍量70%乙醇50℃浸提30min，合并滤液，减压浓缩至原体积的1/3，用10%HCl调pH至3.0，静置，离心去沉淀（4000r・min1）。保留上清液，并测定其中的丹酚酸B含量。　　2.2大孔树脂吸附各种大孔树脂经乙醇、5%盐酸和5%氢氧化钠顺序浸泡3~5h后，以水洗至pH中性。量取丹参提取液100ml各10份，分别加入HPD450，HPD600，HPD700，HPD800，D101，D4020，AB8，X5，S8，NKA9树脂10g，静态吸附24h。过滤，滤液测定丹酚酸B含量，计算吸附率。　　2.3树脂解吸吸附后的树脂，分别用水

5、、30%，50%，70%乙醇各100ml淋洗，收集淋洗液，测定丹酚酸B含量，计算各溶液解吸率。解吸率为解吸量占吸附量的百分率。　　2.4丹酚酸B的含量测定　　采用高效液相色谱法。流动相：乙腈∶甲醇∶水∶甲酸（20∶55∶24∶1），柱温30℃,进样量10μl，流速1ml・min1，运行时间20min，检测波长276nm。丹酚酸B的保留时间为15.3min，分离度大于2.0，理论塔板数不低于5000。　　.4.1标准曲线制备　　精密称定丹酚酸B对照品23mg，水溶解并定容50ml。分别吸取对照液0，0.31，0.62，1.25，2.5，5，10ml，加水定容至10ml，分别得到0，0.0144，

6、0.0288，0.0575，0.115，0.230，0.460mg・ml1对照液梯度，进样高效液相色谱仪。以峰面积X为横坐标，浓度Y为纵坐标，绘制标准曲线。Y=0.000106X+0.005464，r=0.9999。表明丹酚酸B在0~0.460mg・ml1范围内具有良好的线性关系。　　2.4.2样品测定吸取样液2ml，加水溶解并定容至100ml。过滤，滤液过0.45μm微孔滤膜，进样高效液相色谱仪，按标准曲线制作方法测定峰面积，计算样液的丹酚酸B含量。　　3结果　　3.1各种树脂对丹酚酸B的吸附性能比较经测定，丹参提取液的丹酚酸浓度为24.056mg・ml1，各种树脂对其均有吸附，吸附率均在7

7、0%以上。在所试树脂中，除AB8和NKA9外，其它均表现良好的吸附性，吸附率大于90%。结果见表1。吸附能力排序为：D101>S-8>HPD700>HPD450>HPD800>X5>D4020>HPD600>AB8>NKA9。表1不同树脂对丹酚酸B的吸附与解吸率（略）　　3.2各种树脂的解吸性能S8和NKA9树脂在低醇洗脱液下即解吸大部分，而其