大孔树脂分离丹参酚酸b的筛选研究论文

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1、大孔树脂分离丹参酚酸B的筛选研究论文【关键词】丹酚酸B；,.freeliliiorrhizaBge.中的主要活性成分，具有抗动脉粥样硬化、保护心肌细胞、防心脑缺血损伤、抗血小板凝聚、抗肝纤维化、改善记忆、抗肿瘤等作用［1，2］。丹参药材中水溶性成分提取，多以丹参素或原儿茶醛为指标［3，4］，但两者在药材中的含量均较低，只有丹酚酸B为丹酚酸中最主要的有效成分［5］。目前对丹酚酸分离多采用醋酸乙酯萃取法，但该种方法溶剂消耗大，并存在溶剂残留。大孔树脂吸附是目前用于许多有效成分分离的良好方法，成本低、效率高，但至今尚无筛选大孔树脂分离丹酚酸B的报道。本人就大孔树脂对丹参酚酸B的吸

2、附与解吸性能进行综合考察，以期找到一种分离丹参酚酸B的最佳大孔树脂。1材料与仪器1.1材料与试药丹参药材，湖北产，60℃减压干燥后，粉碎过40目筛。大孔树脂：HPD450（弱极性）、HPD600（极性）、HPD700（非极性）、HPD800（中极性）（河北沧州宝恩化工有限公司）、D101（非极性）（天津海光化工有限公司）、D4020（非极性）、AB8（弱极性）、X5（非极性）、S-8（极性）、NKA9（极性）（南开大学化工厂）。乙腈为色谱纯；甲醇、甲酸为分析醇；丹酚酸B对照品（中国药检所，批号20031108）。1.2仪器分离色谱柱（20mm×500mm）；Agilent1

3、100高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱KromasilC18(250mm×4.6mm)/5μm。2方法2.1丹参提取液的制备丹参药材粉，加10倍量70%乙醇50℃浸提1h，过滤后滤渣再加8倍量70%乙醇50℃浸提30min，合并滤液，减压浓缩至原体积的1/3，用10%HCl调pH至3.0，静置，离心去沉淀（4000rmin1）。保留上清液，并测定其中的丹酚酸B含量。2.2大孔树脂吸附各种大孔树脂经乙醇、5%盐酸和5%氢氧化钠顺序浸泡3~5h后，以水洗至pH中性。量取丹参提取液100ml各10份，分别加入HPD450，HPD600，HPD700，HPD800，D101，D4

4、020，AB8，X5，S8，NKA9树脂10g，静态吸附24h。过滤，滤液测定丹酚酸B含量，计算吸附率。2.3树脂解吸吸附后的树脂，分别用水、30%，50%，70%乙醇各100ml淋洗，收集淋洗液，测定丹酚酸B含量，计算各溶液解吸率。解吸率为解吸量占吸附量的百分率。2.4丹酚酸B的含量测定采用高效液相色谱法。流动相：乙腈∶甲醇∶水∶甲酸（20∶55∶24∶1），柱温30℃,进样量10μl，流速1mlmin1，运行时间20min，检测波长276nm。丹酚酸B的保留时间为15.3min，分离度大于2.0，理论塔板数不低于5000。.4.1标准曲线制备精密称定丹酚酸B对照品23m

5、g，水溶解并定容50ml。分别吸取对照液0，0.31，0.62，1.25，2.5，5，10ml，加水定容至10ml，分别得到0，0.0144，0.0288，0.0575，0.115，0.230，0.460mgml1对照液梯度，进样高效液相色谱仪。以峰面积X为横坐标，浓度Y为纵坐标，绘制标准曲线。Y=0.000106X+0.005464，r=0.9999。表明丹酚酸B在0~0.460mgml1范围内具有良好的线性关系。2.4.2样品测定吸取样液2ml，加水溶解并定容至100ml。过滤，滤液过0.45μm微孔滤膜，进样高效液相色谱仪，按标准曲线制作方法测定峰面积，计算样液的丹酚

6、酸B含量。3结果3.1各种树脂对丹酚酸B的吸附性能比较经测定，丹参提取液的丹酚酸浓度为24.056mgml1，各种树脂对其均有吸附，吸附率均在70%以上。在所试树脂中，除AB8和NKA9外，其它均表现良好的吸附性，吸附率大于90%。结果见表1。吸附能力排序为：D101S-8HPD700HPD450HPD800X5D4020HPD600AB8NKA9。表1不同树脂对丹酚酸B的吸附与解吸率（略）3.2各种树脂的解吸性能S8和NKA9树脂在低醇洗脱液下即解吸大部分，而其它树脂较少解吸，只有提高乙醇浓度50%以上才有较多的解吸。总解吸率排序为：HPD450D101X5HPD800D

7、4020HPD700HPD600AB8NKA-9S8。各种树脂对于解吸所需醇浓度有较大差异，如D101和HPD450在50%以上才有较大解吸，而D4020在50%醇浓度以下即有较大解吸。综合解吸与吸附能力，除HPD600，AB8，NKA9，S8外，其它均可作为丹酚酸B的分离用树脂，D101为最佳吸附与解吸树脂。4讨论4.1大孔树脂法作为分离丹酚酸B的方法是方便可行的，通过吸附可将提取液中的酚酸B富集，通过不同浓度醇洗脱，可得到不同纯度的丹酚酸B产品。由于树脂可再生，因而可反复使用，故而是分离丹酚酸B的良好方法。4.