板蓝根高极性部位增强f022抗内毒素活性的研究

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1、板蓝根高极性部位增强F022抗内毒素活性的研究林爱华，刘奕明，丘小惠，刘云海【关键词】板蓝根摘要：目的研究板蓝根高极性部位（Ftp）与板蓝根F022部位协同抗内毒素作用。方法ELISA法检测内毒素刺激鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）水平，内毒素致BCG增敏小鼠死亡实验。结果Ftp联合F022处理巨噬细胞，能显著抑制TNF-α和IL-6水平，效果优于单用F022组；Ftp联用F022显著延长BCG增敏小鼠受内毒素攻击后的存活时间。结论Ftp本身抗内毒素活性较弱，但与F022部位合用，可进一步增强F02

2、2部位的抗内毒素作用。关键词：板蓝根；抗内毒素活性；TNF-α；IL-6Top-polarFractionDevelopingAnti-endotoxinActivityofF022fromRadixIsatidisAbstract:ObjectiveTostudytheanti-endotoxinsynergisticeffectoftop-polarfraction(Ftp)andF022fromRadixIsatidis.MethodsTheproductionofTNF-αandIL-6ofmurineperitonealma

3、crophagesstimulatedbyLPSeasuredbyELISA.ThelethalityofBCG-primedmiceultaneouslytomacrophagesculture1hbeforeadditionofLPS,Productionarkablyinhibited.FtpandF022remarkablyprotectedBCG-primedmicefromLPSinducedlethality.ConclusionTheseresultssuggestthatFtpcandeveloptheanti-en

4、dotoxinactivityofF022fromRadixIsatidis.Keyg/支，Sigma公司产品)；卡介苗（BCG，50mg/支，上海生物制品研究所）；TNF-α和IL-6试剂盒（北京邦定泰克生物有限公司）；新生小牛血清（NBS，批号981128，沈阳安迪生物高科技公司）。RPMI-1640细胞培养液（GIBCO公司）；0.9%氯化钠注射液（NS，批号000429，连云港制药厂）；层析硅胶（100~200目，青岛海洋化工厂）；氯仿、甲醇、石油醚等均为分析纯。1.2主要仪器1815TC型CO2培养箱，Shel-Lab公司产

5、；MK3型酶标仪，LabsystemDragon公司产。1.3动物C57BL/6小鼠(♀，6～8周龄，体重17~19g)，由同济医学院器官移植研究所提供。昆明种小鼠（♂，体重18~22g），由同济医学院实验动物中心提供，均为清洁级。1.4Ftp、F022的提取Ftp提取板蓝根，粉碎，用石油醚回流提取3次，过滤，弃去滤液，残渣晾干；再依次用醋酸乙酯、氯仿提取；最后残渣用水提取3次，合并滤液，减压浓缩，得浸膏，收率为1.8%。F022的提取参见文献〔2〕。1.5腹腔巨噬细胞的制备及培养按文献方法〔6〕：取C57BL/6小鼠，腹腔注射BCG

6、2mg/只，4d后拉颈处死动物，在无菌条件下注入冰冷的RPMI-1640培养液5ml（含80U・ml-1青霉素，100μg・ml-1链霉素，10U・ml-1肝素），轻揉腹部数次，抽取腹腔液，离心，用无血清的RPMI-1640洗涤细胞2次，加入含10%灭活小牛血清的RPMI-1640培养液，调整细胞浓度为2×106个/ml，加入24孔培养板内，每孔1ml，置37℃,5%CO2培养箱内培养2h后，用无血清的RPMI-1640洗去非粘附细胞，贴壁细胞即为巨噬细胞。1.6TNF-α和IL-6的诱生将Ftp样品液（相当于生药2.5g・ml-1）

7、、F022样品液（相当于生药2.5g・ml-1）、Ftp+F022样品液及RPMI-1640各1ml分别处理巨噬细胞1h后，再加入终浓度为50ng・ml-1的LPS分别培养6h和24h后，取上清液，于-20℃保存待测。1.7TNF-α和IL-6的定量检测ELISA法测定各标准品和样品光密度值（OD）,以各标准品浓度对OD值作标准曲线。结果表明TNF-α和IL-6浓度在0.1～10ng・ml-1范围内与OD值具有良好的线性关系。由标准曲线求算出待测样品的TNF-α和IL-6的含量，作统计学t检验。TNF-α抑制率=(对照组浓度-药物组浓

8、度)/对照组浓度×100%。IL-6抑制率的计算方法同上。1.8内毒素致BCG增敏小鼠死亡实验每只小鼠按100mg・kg-1iv给予BCG，10d后，随机分为4组，每组20只，分别为模型对照组、Ftp（25g生药・ml-