板蓝根抗内毒素活性部位及其标准化研究

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1、华中科技大学硕士学位论文板蓝根抗内毒素活性部位及其标准化研究姓名：徐晗申请学位级别：硕士专业：天然药物化学指导教师：方建国;姜凤超2003.4.1华率科技大学硕士学位论文中文摘要厂f内毒素性疾病是自二十世纪以来最严重的致死性疾病之一，中医对内毒素性疾病的早期表现常确证为“实热症”，因此有学者把内毒素看作中医“热毒”，“邪毒”的物质基础。在目前尚无有效的治疗措施的情况下，具有抗内毒素作用的清热解毒类中药受到了国内外学者的普遍重视。板蓝根系十字花科(Cruciferae)菘蓝属(IsatisL．)植物菘蓝(矗atisindigoticaFort．)的干燥根，

2、具有清热解毒，凉血去斑之功效，是一种最常用的清热解毒中。药。文献报道板蓝根有较好的抗内毒素活性，但尚未明确其抗内毒素作用的物质基础。J本论文在国家自然科学基金资助下，旨在系统寻找其中具有抗内毒素活性的化学物质，揭示板蓝根传统清热解毒功效的作用机理和物质基础，为从板蓝根中开发出新型、高效的抗内毒素药物奠定基础。本实验采用系统溶剂法从板蓝根中分离出五个不同极性的化学部位：板蓝根I、II、III、Ⅳ、V部位，结合体内外药理学实验：体外细菌内毒紊定量检查法(鲎试验)和体内小鼠内毒素致死攻击保护实验，证实板蓝根Ⅳ部位具有最强的抗内毒素活性，确定其为抗内毒素活性部位

3、。／为进一步从分子水平确认板蓝根Ⅳ部位的抗内毒素活性，本文采用ELISA法检测其对LPS刺激HI．-60细胞分泌炎性细胞因子的抑制作用。实验结果证明板蓝根Ⅳ部位在实验所设¨的=种作用情况一卜对于LPS诱导HL．60细胞产生TNF．o、IL-8均有显著的抑制作用，其中LPS和供试品同时与HL-60细胞共育的抑制作用最为显著，这与早先体外鲎实验评价板蓝根抗内毒索的结论相符，进一步确证了板蓝根Ⅳ部位的抗内毒素活性。为有效控制和分析此活性部位的质量，本文进一步建立了此部位的标准指纹图谱，并确定其含量最高的化学成分为腺苷。据文献报道腺苷具有显著的抗内毒素活性，如改

4、善肠道屏障功能，减少肠内细菌和内毒素移位；与腺苷受体激动剂联用，明显降低LPS诱导的炎性介质的释放和保护小鼠免受内毒素致死攻击的功能。可以认为腺苷为板蓝根抗内毒素活性的主要指标成分之一，并且初步考察板蓝根的量效关系，结果发现腺苷的存在及含量的高低与板蓝根的抗内毒素活性密切相关。本文以腺苷作为板蓝根中的主要活性指标成分，建立了I-IPLC法测定板蓝根药材及制剂中腺苷的含量测定方法。结果表明此方法专属、可控，操作简便，结果可靠。为建立板蓝根及其制剂的质量控制方法作出了有益的尝试。j户。—一本研究系统、全面地筛选并评价了板蓝根抗内毒素的活性部位，建立了其标准指

5、纹图谱，初步考察了其量效关系，首次建立起了板蓝根药材及其制剂中主要活性指标成分腺苷的含量测定方法，为今后进一步以板蓝根Ⅳ部位开发具有抗内毒素活性的中药新药奠定了一定基础，并为将腺苷确定为板蓝根质量控制指标成分提供了科学依据，填补了板蓝根及其制剂缺乏科学合理的含量测定指标成分的空白。，———————————————～，7关键词：板蓝根}腺苷。指纹图谱?谱效关系÷抗内毒素、盾量测定ELIsj?、／／歪竖]眵7’’’一一一L＼j兰塑!i垡兰一一—』鲨型塑鲨一ABSTRACTWithheavyuseofantibioticsintheclinic，endotox

6、icdiseaseshavebecameabigproblemduetothelackofspecificchemo-therapy．RegardingtraditionalChinesemedicaltheoriesandclinicalexperiences，sometraditionalChinesemedicinesandtheirpreparationsareconsideredtopossesanti-endotoxiceffectsinexperimentalstudies．RadixIsatidisisoneofthemostcommon

7、ly-usedtraditionalChinesemedicinesforantipretic，antiviralanddetoxifyingpurposes．ItsoriginalsourcewasidentifiedtobethedriedrootsofIsatisindigoticaFort(Cruciferae)．ItwasreportedthatRadixIsatidishadtheanti．endoxiticactivity,buttheactiveconstituentsstillremainedunknown．Toevaluateandc

8、omparetheanti．endotoxicactivityoffivedif