板蓝根高极性部位增强F022抗内毒素活性的研究

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1、板蓝根高极性部位增强F022抗内毒素活性的研究作者：林爱华，刘奕明，丘小惠，刘云海【关键词】板蓝根摘要：目的研究板蓝根高极性部位与板蓝根F022部位协同抗内毒素作用。方法ELISA法检测内毒素刺激鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α、白介素6水平，内毒素致BCG增敏小鼠死亡实验。结果Ftp联合F022处理巨噬细胞，能显著抑制TNF-α和IL-6水平，效果优于单用F022组；Ftp联用F022显著延长BCG增敏小鼠受内毒素攻击后的存活时间。结论Ftp本身抗内毒素活性较弱，但与F022部位合用，可进一步增强F022部位的抗内毒素作用。关键词：板蓝根；抗内毒素活性；T

2、NF-α；IL-6Top-polarFractionDevelopingAnti-endotoxinActivityofF02fromRadixIsatidisAbstract:ObjectiveTostudytheanti-endotoxinsynergisticeffectoftop-polarfraction(Ftp)andF02fromRadixIsatidis.MethodsTheproductionofTNF-αandIL-ofmurineperitonealmacrophagesstimulatedbyLPSwasmeasuredbyELISA

3、.ThelethalityofBCG-primedmicewasinducedbyandF02wasaddedsimultaneouslytomacrophagesculture1hbeforeadditionofLPS,Productionwasremarkablyinhibited.FtpandF02remarkablyprotectedBCG-primedmicefromLPSinducedresultssuggestthatFtpcandeveloptheanti-endotoxinactivityofF022fromRadixIsatidis.Ke

4、ywords:RadisIsatidis；Anti-endotoxinactivity；TNF-α；IL-板蓝根是十字科菘蓝属植物菘蓝IsatiszndigoticaFort.的干燥根，为清热解毒之常用中药，常和其他中药组成复方，广泛用于多种疾病如流感、乙脑、肝炎等。内毒素是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖成分，中医认为内毒素为“热毒、邪毒”的物质基础。早期研究发现，板蓝根具有抗内毒素活性［1］。我们在研究中找到板蓝根抗内毒素活性强的F022部位［2］，并从该部位中分离得到丁香酸等活性指标成分［3］。板蓝根中富含氨基酸、多糖等高极性物质，此类物质已证实具有免疫调节作

5、用［4，5］，对板蓝根中含有该类物质高极性部位的抗内毒素活性以及对F022部位抗内毒素作用影响的研究却未见报道。为此，本文将板蓝根经不同极性溶剂梯度洗脱后得高极性Ftp部位，研究Ftp在板蓝根抗内毒素活性中的作用。1材料与方法药品与试剂板蓝根，经我院药学部鉴定为十字花科植物菘蓝的干燥根。细菌内毒素(700EU/支，福建省药品检验所，5mg/支，Sigma公司产品)；卡介苗；TNF-α和IL-6试剂盒；新生小牛血清。RPMI-1640细胞培养液；%氯化钠注射液；层析硅胶；氯仿、甲醇、石油醚等均为分析纯。主要仪器1815TC型CO2培养箱，Shel-Lab公司产

6、；MK3型酶标仪，LabsystemDragon公司产。动物C57BL/6小鼠(♀，6～8周龄，体重17~1g)，由同济医学院器官移植研究所提供。昆明种小鼠，由同济医学院实验动物中心提供，均为清洁级。Ftp、F022的提取Ftp提取板蓝根，粉碎，用石油醚回流提取3次，过滤，弃去滤液，残渣晾干；再依次用醋酸乙酯、氯仿提取；最后残渣用水提取3次，合并滤液，减压浓缩，得浸膏，收率为%。F022的提取参见文献［2］。腹腔巨噬细胞的制备及培养按文献方法［6］：取C57BL/6小鼠，腹腔注射BCGmg/只，d后拉颈处死动物，在无菌条件下注入冰冷的RPMI-1640培养液

7、ml，轻揉腹部数次，抽取腹腔液，离心，用无血清的RPMI-1640洗涤细胞2次，加入含10%灭活小牛血清的RPMI-1640培养液，调整细胞浓度为2×106个/ml，加入24孔培养板内，每孔1ml，置37℃,5%CO2培养箱内培养h后，用无血清的RPMI-1640洗去非粘附细胞，贴壁细胞即为巨噬细胞。TNF-α和IL-6的诱生将Ftp样品液、F022样品液、Ftp+F022样品液及RPMI-1640各1ml分别处理巨噬细胞1h后，再加入终浓度为50ng・ml-1的LPS分别培养6h和24h后，取上清液，于-20℃保存待测。TNF-α和IL-6的定量检测ELI

8、SA法测定各标准品和样品光密度值,以各标准品浓度对O