survivin+sirna、hsp70双基因转染对肝癌细胞系hepg2内源survivin及hsp70表达影响

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1、内蒙古医学院硕士学位论文SurvivinsiRNA、HSP70双基因转染对肝癌细胞系HepG2内源Survivin及HSP70表达的影响姓名：张荣繁申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：新燕20070501缩略语英文全称Ｂａｓｅｐａｉｒ中文全称碱基对一印一蛳ＣｏｍｐｌｅｎｍａｔａｒｙＤＮＡ３一（（３一ＣｌＤｌ∞‘ｄ。ｐｑ）ｙＩ）ｄｉｍｅｔｂ，ｋｍｍ瑚ｉ０）ｐＩＤｌⅪｎ∞ｄ蜘ｃａｃｉｄＤｅｏｘｙｒｉｈｏｎｕｄｅｏｔｉｄｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅＤｉｅｔｈｙｌｄＷｏｅａｒｔｘｒａａｔｅＤＬ—Ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏ

2、ｌＭｅｇｅｎｇｅｒＲＮＡ哳矧ｄｅｎｓｉｔｙｍｌａｃｒｙｌａｒｍｍｇｄｅｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓＰｏｌｙｍｅｒａ∞ｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰｈｅｎｙｌｍｅｔ］ｍｎｅｓｔｄｆｏｎｙｌｆｌｕｏｒｉｄｅ＿。Ｉ∞ｄｐｅｒｍｉｎｕｔｅ互补ＤＮＡ３一（３一（胆酰胺丙基）二甲氨基】丙磺酸内盐脱氧核糖核苷三磷酸焦磷酸二乙醇＝硫苏糖醇信使ＲＮＡ光密度值聚丙烯酰胺凝胶电泳聚合酶链式反应苯甲基磺酰氟转每分钟Ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｍｓｅ—ｐｏｌｙｍｅｍｓｅｃｈａｉｎｓｃＩｄｉｍｄｏｄｅｃｏｙｌｓａｌｉｎｅｒｅ“ｏｎ反转录聚

3、合酶链式反应十二烷基磺酸钠＝二８ｌ｜：二二？～ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉＩＩｇＲＮＡＮ。Ｎ，Ｎ’，Ｎ’一Ｔｅｕ＇ａｍｅｔ＿ｈｙｌｅｄｌｙｌｅｎｅｄｉｓｍｉｎｅＰｄ曲ｌ口”ｇｌｙｃｏｌｓｏｒｂｉｔａｎｍｏｎｏ］ａｕｒａｔｅ小干涉ＲＮＡＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’一四甲基＝乙肢三羟甲基氨基甲烷吐温一２０Ｔｒｉｓｈｙｄｒｏ㈣ｅ内蒙古医学院学位论文原创性声明郑重声明：本人所呈交的学位论文是在导师指导下，独立进行研究所取得的研究成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文内容不包含其他个人或集体已经公开发表或撰写过的研究成果。对本文

4、的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人学位论文与资料若有不实，愿意承担一切相关的法律责任。论文作者签名抠萃缒泗７年∑月搿日学位论文版权使用授权书本人完全了解学院有关保留、使用学位论文的规定，同意学院保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。学院享有发表、复制、查阅、借阅及申请专利等权利。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。同时本人保证：毕业后发表、使用学位论文以及结合学位论文研究课题再撰写的文章，作者署名单位一律为内蒙古医学院。论文作者签名箍璋錾多甙．７年５月≯扩日

5、曙导狮币名、／超叫馘夕玉≥中文摘要目的探讨ｓｕｒｖｉｖｉｎｓｉＲＮＡ、ＨＳＰ７０双基因转染对肝癌细胞系ＨｅｐＧ２内源ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＨＳＦＴ０表达的影响，为进一步深入研究ｓｕｒｖｉｖｉｎｓｉＲＮＡ、ＨＳＰ７０双基因对肝癌细胞系ＨｅｐＧ２生物学特性的影响奠定实验基础。方法１、常规培养肝癌细胞系ＨｅｐＧ２。２、将已构建的真核表达载体（ｐｌｇＥＳ２一ＥＧＦＰ—ｓｕｒｖｉｖｉｎｓｉＲＮＡ、ｐｌＲＥＳ２一ＥＧＦＰ—ＨｓＩｙ７０）用脂质体介导转染肝癌细胞系ＨｅｐＧ２，转染７２小时，收集各组细胞，利用倒置荧光显微镜观察转染

6、后的细胞，通过ＲＴ—ＰＣＲ、ｗｅｓｔｅｒｉｌ—ｂｌｏｔ检测转染后细胞中ｓｕｒｖｉｖｉｎｍＲＮＡ、ｓｕｒｖｉｖｉｎ蛋白及ＨＳＰ７０蛋白表达的变化。结果１、转染真核表达载体与转染空载体的肝癌细胞系ＨｅｐＧ２于倒置荧光显微镜下可见绿色荧光。２、转染真核表达载体的ＨｅｐＧ２细胞与转染空载体的ＨｅｐＧ２细胞和未转染的ＨｅｐＧ２细胞相比，ｓｕｒｖｉｖｉｎｍＲＮＡ和ｓｕｒ－ｖｉｖｉｎ蛋白表达水平降低，而ＨＳＰ７０蛋白表达升高。结论１、ｓｕｒｖｉｖｉｎｓｉＲＡＮ与ＨＳＰ７０双基因转染成功。２、ｓｕｒｖｉｖｉｎｓｉＲＮＡ能干扰ＨｅｐＧ

7、２内源ｓｕｒｖｉｖｉｎ的表达，ＨＳＰ７０能上调ＨｅｐＧ２细胞ＨＳＰ７０蛋白的表达。关键词ＳｕｒｖｉｖｉｎｓｉＲＮＡＨＳＰ７０肝癌细胞ＥｆｆｅｃｔｏｆｓｕｒｖｉｖｉｎｓｉＲＮＡａｎｄＨＳＰ７０ｇｅｎｅｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｓｕｒｖｉｖｉｎａｎｄＨＳＰＴＯｉｎｈｅｐａｔｏｍａｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｅｆｆｅｃｔｏｆｂｏｔｈｏｆｓｕｒｖｉｖｉｎｓｉＲＮＡａｎｄＨＳＰ７０ｇｅｎｅｓｏｎ

8、ｔｈｅｅｎｄｏｇ—ｅＥＩＯＵＢｓｕｒｖｉｖｌｎａｎｄＨＳＰ７０ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｅｐａｔｏｍａＧⅡｃｉｎＤｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓａｎｄｅｓｔａｂ－ｌｉｓｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｂａｓｅｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｉｎｇｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｂｏｔｈｏｆｓｕｒｖｌｖｉｎｓｉＲＮＡａｎｄＨＳＰＴ０ｇｅ