黄芩酶解最佳工艺条件的正交实验筛选

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1、黄芩酶解最佳工艺条件的正交实验筛选【关键词】正交设计；,,黄芩；,,酶解；,,黄芩苷　　摘要：目的以黄芩苷为指标，优化黄芩酶解提取的最佳工艺条件。方法运用正交设计筛选酶解参数。以高效液相色谱法测定黄芩苷，并计算其收率。结果当复合酶用量为底物的1％，保温沉淀时间1.5h，提取温度50℃，提取时间2h时，黄芩苷收率达17.2%。结论在优化的酶解条件下，黄芩苷的收率最高。该研究为黄芩苷提取物的制备提供了一种新方法。　　关键词：正交设计；黄芩；酶解；黄芩苷　　TheOptimumExtractionTe

2、chnologyofBaicalinfromRadixScutellariabyEnzymaticHydrolysis　　Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractionprocessofbaicalinfromScutellariabaicalensisontheconditionofenzymatichydrolysis.MethodsTooptimizebytheorthogonaldesign，andtodeterminethecontentofbaic

3、alinbyHPLC.ResultsTheoptimumextractionconditione/substrateeofenzymatichydrolysisperatureof50℃,andkeptat80℃for1.5hafteradjustingthepHvalueto2.0.ConclusionTheneethodisdevelopedforpreparingthebaicalinextract.　　Keyatichydrolysis;Baicalin　　黄芩为唇形科植物Scutell

4、ariabaicalensisGeo.的干燥根，性寒味苦，具有清热燥湿、泻火解毒的功效。黄芩苷(baicalin)是黄芩中的主要有效成分。现代药理研究表明：黄芩苷具有清热解毒、抗炎利胆、保肝、抗氧化和抗肿瘤等功能，在临床上被广泛应用〔1〕。中药材有效成分往往被包裹在细胞壁内，在药用植物有效成分提取过程中，选用适当的酶作用于药用植物材料，可以使细胞壁及细胞间质中的纤维素、半纤维素、果胶质等物质降解，破坏细胞壁的致密构造，减小细胞壁和细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力，从而有

5、利于有效成分的溶出〔2〕。目前，黄芩苷的提取工艺多以水提为主，运用生物酶解进行提取的报道不多。为寻找酶解提取最佳工艺、提高黄芩苷的产率和纯度、减轻后处理的负担，本文运用正交设计全面考察了酶用量、提取时间和温度、保温沉淀时间等因素及其交互作用对黄芩苷收率的影响。　　1材料与方法　　1.1仪器美国安捷伦公司Agilent1100型高效液相色谱仪(包括四元泵,真空脱气机,自动进样器,柱温箱DAD检测器),Agilent1100化学工作站；上海安亭科学仪器厂AnkeLXJ-ⅡB型离心机；上海跃进医学仪器

6、厂数显式恒温水浴锅。　　1.2药材及试剂提取用复合酶（内含纤维素酶136万u/ml，半纤维素酶15万u/ml，果胶酶160万u/ml，β-葡萄糖酶0.8万u/ml）为宁夏和氏璧生物有限公司生产；黄芩苷对照品(自制，HPLC归一化法计算其含量大于98%)；生药黄芩的干燥根(产地为青岛胶南黄芩GAP产业基地)，经青岛市炜伦生物技术有限公司汪志仁药师鉴定为唇形科植物ScutellariabaicalensisGeo.的干燥根。甲醇为色谱纯，水为超纯水，醋酸为分析纯。　　1.3方法　　1.3.1黄芩药材

7、前处理由于黄芩中黄芩苷酶的存在，提取前若未先除酶，湿润下的黄芩粉在32℃恒温5h，则黄芩苷完全酶解，形成很不稳定的邻三羟基黄酮，极易氧化变成绿色醌类衍生物，影响黄芩苷含量的提取〔3〕。本实验采用的复合酶最佳提取温度为25～55℃。为此，在进行实验前宜先将黄芩原药材粉碎，通过热蒸气加热30min,以便“杀酶保苷”，避免原料中黄芩苷酶对黄芩苷提取的影响。　　1.3.2黄芩酶解工艺步骤将黄芩药材粉碎后，通过热蒸气加热30min灭酶，再加入10倍水和适量的复合酶，按表1和表2设计的技术参数提取。将提取液

8、转移至离心杯中，5000r/min离心15min，取上清液，加盐酸调pH值为2，在80℃保温，使黄芩苷析出。过滤，沉淀物用水洗至pH=5.0,冻干，即得黄芩苷粗提物。　　1.3.3正交实验设计方案〔4〕因素水平见表1。　　表1黄芩酶解工艺因素水平（略）　　1.4黄芩苷含量测定〔5〕　　1.4.1色谱条件色谱柱BECKMANC18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为甲醇∶水∶醋酸＝47∶53∶0.2；流速1.0ml/min，检测波长280nm，进样量10μl。　　1.4.2标准曲线的制备精