黄绿青霉素对心脏毒性损伤作用

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1、黄绿青霉素对心脏毒性损伤作用刘密凤，王丽华，林林，姚洪菊，张芳鸣，王文革，杨建伯【摘要】目的观察黄绿青霉素(CIT)对离体心肌细胞及大鼠心肌组织结构和功能的损伤。方法电镜检查法观察黄绿青霉素致离体心肌细胞超微结构的改变，并对15mg／(kg·d)CIT喂饲8周的大鼠心肌组织进行病理学观察。结果光镜下CIT处理组大鼠心肌发生变性和坏死，病变呈灶状或条索状分布，有炎性细胞浸润，肌原纤维凝集崩解，部分心肌细胞颗粒变或空泡变性。电镜下，25μmol/LCIT组，细胞形状不规则，染色质边集，肌丝明显，胞质内存在脂滴颗粒，线粒体嵴清晰，部分线粒体空泡变性；25μmo

2、l/LCIT可使完整的肌细胞结构消失；随剂量增加，毒性作用增强。结论CIT在体内和体外均可引发心肌的变性和坏死。【关键词】黄绿青霉素　　黄绿青霉素(CIT)是黄绿青霉的次级毒性代谢物，能在较低的温度和较高的湿度下生长〔1〕，自然界中广泛存在，容易污染新收获的农作物，呈黄绿色霉变，食用后可发生急性中毒，是一种与人类生活密切相关的真菌毒素。现已证明，该毒素具有神经毒作用〔2〕及致畸性〔3〕。也有研究认为，其可能是克山病的病因〔4〕。该毒素在体外能抑制人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）活性及白色念球菌生长〔5〕。本文旨在从体内和体外水平观察黄绿青霉素的心脏毒性作

3、用。　　1材料与方法　　11仪器和试剂Olympus光学显微镜和倒置显微镜：CO2恒温培养箱；超速低温离心机；净化工作台；Millipore超纯水系统；spc-10Avp液相色谱仪(日本岛津公司)；Uv-VIS检测器；数据采集和处理使用的色谱工作站；凯氏振荡器；手术器械及细胞培养瓶等。黄暗青霉菌(PenicilliumcitreonigrumDierckx,PCV)(中科院微生物研究所)；CIT标准品和胶原酶Ⅱ(美国Sigma公司)；最低必需培养基(MEM)和胎牛血清(美国GIBCO公司)；胰蛋白酶(美国AMRESCO公司)；其余试剂均为国产分析纯。　　

4、12实验动物雌性in后弃去，加入10ml1mg／ml的胶原酶Ⅱ，37℃下消化30～40min，500r／min离心5min，含20％胎牛血清的基础培养液制成细胞悬液，37℃，5％CO2温箱内培养。根据心肌细胞和成纤维细胞贴壁时间的不同，采用差速贴壁分离法，并在前3d的培养液中加入01mmol/L5-溴脱氧核苷酸，以抑制成纤维细胞的增殖。　　14黄绿青霉素致离体心肌细胞损伤的电镜观察CIT连续倍比稀释成25，25μmol/L剂量组，按常量分别加入已基本长成单层的心肌细胞中，同时设立正常细胞对照组。24h后将细胞刮下，25％戊二醛固定，常规电镜检查。

5、　　15黄绿青霉素致大鼠心肌组织的毒性观察黄绿青霉素的生物合成〔1〕，并利用高效液相色谱法进行检测〔6〕。g／(kg·d)CIT，并随体重增加而增加。8周后处死动物，剪取心肌组织，10％甲醛固定，常规病理学检测。　　2结果　　21CIT对心肌细胞超微结构的影响培养的心肌细胞，体积较大，表面光滑，胞质内有肌丝散在分布，Z线清晰，质膜下游离核蛋白体丰富，线粒体发达，嵴明显可见。25μmol/L剂量组，肌细胞为不规则形，细胞核内高密度的染色质边集核膜下，核周Z线结构清晰，肌丝明显，胞质内存在脂滴颗粒，线粒体嵴清晰，相邻细胞以脂膜紧贴，未见连接结构，部分线粒

6、体出现空泡变性。25μmol/L剂量组，未见完整的肌细胞结构，疑为肌细胞的胞质内有大量的脂滴颗粒存在，细胞功能状态不佳，其他肌细胞轮廓不清，胞质内线粒体高密度团块状，嵴微细结构不明显，见图1～3。　　图1电镜下正常培养心肌细胞（略）　　图2电镜下25μmol/LCIT处理的心肌细胞（略）　　图3电镜下25μmol/LCIT处理的心肌细胞（略）　　22黄绿青霉素对实验动物体重及脏体比值的影响实验开始时，实验组与对照组体重比较，差异无统计学意义(P＞005)。给予CIT后，实验组体重无明显增加，对照组体重增长明显(P001)。实验组大鼠的心、肝、肾脏与

7、体重的比值均高于对照组，差异有统计学意义(P001)。　　23黄绿青霉素对大鼠心肌组织结构的影响光镜下，对照组心肌纤维排列规整，无明显异常。实验组大鼠心室肌均出现明显病变，病变呈灶状或条索状分布，涉及范围较大，有大量淋巴细胞和单核细胞浸润，间质水肿，心肌细胞呈颗粒变性，肌浆凝聚，肌原纤维凝集、崩解，部分心肌细胞空泡变性，见图4，5。　　图4CIT处理组心室肌病变(HE染色，×40)（略）　　图5CIT处理组心室肌(HE染色，×200)（略）　　3讨论　　黄绿青霉素是黄绿青霉、黄暗青霉、瘿青霉、垫状青霉、毒青霉等青霉菌的次级毒性代谢物，由α-吡喃酮色基、

8、多烯部分和氢呋喃环3部分组成〔1〕，其中吡喃酮-多烯结构中的共轭多