脑宁康颗粒对脑缺血预适应大鼠hsp70表达影响的实验研究

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1、脑宁康颗粒对脑缺血预适应大鼠HSP70表达影响的实验研究【摘要】目的观察中药脑宁康(NNK)颗粒对经脑缺血预适应(IPC)处理后大鼠HSP70表达的影响。方法根据Pulsinelli四管法及Liu法分别制作大鼠IPC及脑缺血再灌注(IR)模型，应用免疫组化SP法作HSP70染色，比较NNK颗粒对IPC和IR两种模型大鼠HSP70表达的影响，并以阿斯匹林作对照。结果NNK在两模型中均可使HSP70表达明显增强(P0.05～0.01),且效应显著高于阿斯匹林(P0.05)，但两模型之间比较无显著性差异。且NN

2、K能够延缓HSP70表达强度的减弱。结论NNK颗粒通过增强IPC和缺血状态中HSP70表达，扮演了强化IPC及药物预适应角色，旨在增加脑神经细胞对缺血、缺氧的耐受力，并通过对HSP70的干扰，获得稳定神经细胞结构，维护其正常功能的药理效应。【关键词】脑宁康颗粒；缺血预适应；脑；HSP70Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofNaoningkangparticleontheexpressionofthe70KDaheatshockprotein(HSP70)fo

3、lloicprecondition.MethodsTherats'IPCandischemicreperfusion(IR)modelsadebymethodsofPulsinellifourtubesandLiurespectively.TheexpressionofHSP70intodelsincludingIPCandIRmunohistochemistrymethod.ResultsNNKparticlecouldincreasetheHSP70expressionofIPCandinthesta

4、teofischemiaandplaytheroleonstrongingischemicpreconditionofIPCandmedicine.TheeffectofNNKparticlesuggestsincreasingthetoleranceofcentralnervecellsfacingtoischemiaandhypoxia.ConclusionNNKparticlealsocanstabilizethestructureofneuronthroughinterfereonstrateth

5、epharmacologiceffectofkeepingtheneuronnormalfunctions.Keyicpreconditioning;Brain;HSP70近年来，脑缺血预适应(ischemicpreconditioning,IPC)过程中产生的机体重要保护因子热休克蛋白（Heatshockprotein,HSP）已引起广泛关注。对整体和离体经应激作用后的细胞或组织的研究表明〔1〕，当细胞受到损伤时，均伴随HSP含量增加。因而，普遍认为HSP的功能主要是在于稳定细胞的结构，从而维护细胞的正

6、常生理功能。在脑缺血损伤领域的研究显示，HSP具有保护脑细胞，增加脑细胞对缺氧的耐受性，明显降低神经元对谷氨酸毒性作用的敏感性〔2〕，从而抵抗神经元进一步致死性损伤的作用。本研究拟观察HSP70在IPC和脑缺血再灌注(ischemicreperfusion,IR)中的表达及脑宁康(NNK)对其的影响。现报道如下。1材料与仪器1.1仪器多功能显微镜(OLYMPUS-269865,JAPAN)，电镜（JEM-1200EX,JAPAN），医用低温冷冻冰箱（SANYO,JAPAN），电子蠕动泵（LDB-M）。1.

7、2试剂与药品鼠抗HSP70单克隆抗体（NeomarkerCorporation,USA），链卵白素－生物素结合辣根过氧化酶，1∶300zymed,USA)，染色试剂盒（LabvisionCorporation,USA）。NNK颗粒由山东中医药大学附属制剂厂生产，生药含量为5g/g；肠溶阿斯匹林(ASP)为沈阳克达药厂生产，批号970208。1.3动物雄性ODEL)、假手术组(FO)、ASP组和NNK组,每组均按IPC方法和IR方法制模,共8组,每组6只。2.3模型制备2.3.1IPC模型制备IPC模型根据

8、Pulsinelli四管法及Liu法〔3〕制备。戊巴比妥钠50mg/kg经腹腔注射麻醉，颈部正中线纵行切口，分离暴露第1颈椎，寻找双侧翼小孔，电灼封闭双侧椎动脉。翻转体位，颈部纵行切口，分离暴露双侧颈总动脉约2cm，4号手术线牵引。头部正中切口，顶部钻孔，埋藏微电极，齿科水泥固定。动脉夹夹闭两侧颈总动脉，造成全脑缺血，微电极连接八道生理仪观察脑电图,验证缺血效应。缺血3min后,松开动脉夹，恢复供血，缝合皮肤，按成人剂量7倍分