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1、脑血灵颗粒对脑出血大鼠炎症相关基因表达的影响论文郑安，叶钦勇，林求诚，黄华品，刘楠【关键词】脑血灵颗粒剂；脑出血；炎症；肿瘤坏死因子α；白细胞介素EffectofNaoxuelinggranuleonexpressionsofinflammationrelatedgenesafterintracerebralhemorrhageinrats【Abstract】AIM:Toinvestigatematorycascadereactionafterintracerebralhemorrhageinrats.METHOD
2、S:MaleSDratsreceivedaninfusionof50μLautologousbloodintotherightbasalganglia.Theratslydividedintoshamoperatedgroup,modelgroup,HuatuozaizaobolusgroupandNaoxuelinggranulegroup.TheexpressionsofTNFα,IL1β,iNOSmunohistochemistryandinsituhybridization.RESULTS:Theexpre
3、ssionsofTNFα,IL1β,iNOSallincreasedon7daftermodeling.NaoxuelinggranulemarkedlydecreasedtheexpressionsofTNFα,IL1β,iNOSattheproteinandmRNAlevels.paredodelgroup,HuatuozaizaobolusgrouphadnosignificantdifferenceintheexpressionsofTNFα,IL1βandiNOS.CONCLUSION:Themechan
4、ismofNaoxuelinggranuleagainstintracerebralhemorrhagemayberelatedtotheeffectofinhibitinginflammatorycascadereaction.【Keyorrhage;inflammation;tumornecrosisfactoralpha(TNFα);interleukin1;Nitricoxidesynthase【摘要】目的：观察脑血灵颗粒对脑出血大鼠炎症相关基因（TNFα,IL1β,iNOS）表达的影响.方法：以自体血制作
5、大鼠脑出血模型,.freell的供试液.1.1.3主要仪器NarishigeSR5N立体定向注射仪；无锡医疗器械厂50μL微量进样器；日本OlympusBX51系统生物显微镜；德国LeicaCM1900恒温冰冻切片机；美国AlphaImager2200计算机全自动图像分析系统.1.1.4主要试剂兔抗大鼠TNFα,IL1β,iNOS多克隆抗体、SABC免疫组化试剂盒、地高辛标记的TH,TNFα,IL1β,iNOS寡核苷酸探针、原位杂交专用盖玻片、原位杂交检测试剂盒(武汉博士德生物有限公司)，DAB显色剂（福州迈欣公司
6、）.1.2方法1.2.1脑出血模型的制备将大鼠称体质量后，以100mL/L水合氯醛300mg/kg体质量腹腔注射麻醉后，腹位固定于立体定向仪上，参照脑立体定向图谱，顶部皮肤正中矢状切开，调节前囟与矢状缝在同一水平面上，穿刺部位定在前囟前0.2mm，向右旁开3mm处，进针深度为6mm(尾壳核部位)，先用牙科钻钻约直径0.1mm骨窗.微量进样器取未肝素化的新鲜自体股动脉血50μL，并结扎股动脉.立即用进样器插入定位点在5min内低压力(13.33kPa)缓慢注入自体股动脉血，注射后留针5min，退出穿刺针后用医用胶封闭
7、颅骨钻孔，缝皮消毒.1.2.2分组大鼠随机分4组，每组8只，脑血灵颗粒治疗组(36.15g/kg，按体表面积计算相当于70kg成年人临床生药用量的2倍）,华佗再造丸对照组(1.6g/kg),模型对照组(等容积生理盐水),假手术组(等容积生理盐水).1.2.3免疫组织化学检测TNFα,IL1β,iNOS阳性细胞的表达免疫组织化学染色步骤：①玻片恢复至室温，体积分数为0.003的H2O2室温作用30min，阻断内源性过氧化物酶.②0.01mol/LPBS洗3min×3次；③山羊血清封闭，室温30min；④甩去血清，分别
8、加入一抗Bcl2（1∶200）、Caspase3（1∶300）37℃孵育2h，0.01mol/LPBS洗3min×3次；⑤加生物素标记二抗，37℃,30min，0.01mol/LPBS洗3min×3次；⑥加标记过氧化物酶的链酶素亲和素复合物，37℃，20min，0.01mol/LPBS洗3min×4次；⑦DAB显色，适时终止，自来水冲洗；⑧苏木素复染细胞核；
