祛疣洗剂提取纯化工艺研究

《祛疣洗剂提取纯化工艺研究 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、祛疣洗剂提取纯化工艺研究鞠建明钱大玮朱玲英沈红李英【摘要】：目的研究祛疣洗剂制备工艺，优选最佳提取、纯化工艺条件。方法以羟基红花黄色素A含量、含固量为检测指标，用正交实验考察了3种因素（加水量、煎煮时间、煎煮次数）对其水煎煮工艺的影响；然后比较了不同的醇沉浓度的去杂效果。结果祛疣洗剂最佳水提工艺条件为加12倍量水，煎煮2次，1h/次；去杂工艺以60%醇沉为佳。结论制备工艺合理。【关键词】祛疣洗剂高效液相色谱正交实验醇沉羟基红花　　黄色素A祛疣洗剂是江苏省中医药研究院临床经验方，疗效确切。该方由狼毒、红花、板蓝根等6味药组成，具有清热解毒，杀虫除湿之功，用于治疗各种赘疣。红花为

2、本方中主要药味，主要活性成分为羟基红花黄色素A。为了确保该制剂制备工艺的合理性，我们以羟基红花黄色素A为主要考察指标，对处方的水煎煮工艺和纯化工艺进行了优选，确定了合理的制备工艺。1仪器与试药1.1仪器pol。2.1.3含量测定含固量测定：精密量取样品液25ml，水浴蒸干，105℃烘3h，取出置干燥器内冷却30min，迅速称重。结果见表2。羟基红花黄色素A的含量测定：①色谱条件〔2，3〕：色谱柱为AlltimaC18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇-乙腈-0.5%磷酸水（26∶2∶72）；流速1.0ml·min-1；检测波长400nm；柱温35℃。在此条件下羟

3、基红花黄色素A与相邻峰达到基线分离（见图1）。②对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品1.866mg置于10ml量瓶中，用25%甲醇溶解并定容至刻度，即得每毫升含0.1866mg的对照品溶液。③供试品溶液的制备：取正交实验样品液适量，离心，上清液过0.45μm的微孔滤膜，即得供试品溶液。④标准曲线的制备：精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液1，5，10，15，20，25μl，注入液相色谱仪，测定其峰面积，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程：Y=2.55×106X-2.20×105，r=0.9998。⑤精密度实验：精密吸取对照品溶液10μl，连续进样6

4、次，峰面积的RSD为0.4%。⑥供试品溶液的含量测定：精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，依法测定，计算含量。结果见表2。2.1.4方差分析结果将1～9号实验综合评分进行方差分析，结果见表3。表3方差分析结果2.1.5正交实验优选结果由直观分析可知，极差(R)最大的为C因素,其次分别为B因素、A因素。说明对羟基红花黄色素A及浸出物含量影响最大的为煎煮次数，其次分别为煎煮时间、加水量，最佳组合为A3B2C2；从方差分析结果可知：A，B，C3因素均无统计学意义（P>0.05），选任何水平都可以，所以以极差分析结果A3B2C2作为最佳提取工艺，即加12倍量水，煎煮2次

5、，煎煮1h/次。2.1.6验证实验按优选的最佳提取工艺进行实验，测定样品中羟基红花黄色素A的含量及浸出物含量。结果见表4。表4工艺验证实验结果由表4可见，确定的提取工艺优于正交实验中的任何一组，且重复性较好，说明确定的工艺合理。2.2纯化工艺中醇沉浓度的优选2.2.1样品液的制备按处方比例称取药材725g，依照最优提取工艺进行煎煮，减压浓缩（65℃）至相对密度为1.10（60℃）的清膏，备用。取清膏3份，每份100ml，分别加乙醇111，171，280ml，使乙醇浓度达50%，60%，70%，室温下静置48h，抽滤，将滤液用相应浓度乙醇定容至400ml，备用。2.2.2含量测

6、定含固量测定：精密量取醇沉前药液10ml及醇沉液50ml，水浴蒸干，105℃烘3h，取出置干燥器内冷却30min，迅速称重，计算即得。羟基红花黄色素A含量测定：精密量取醇沉前药液2ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，得清膏供试品溶液；精密量取3种不同醇沉液2.5ml,置10ml量瓶中，加相应浓度的乙醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，得醇沉供试品溶液。精密吸取各供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，依法测定。结果见表5。表5醇沉优选结果羟基红花黄色素A含量指每毫升清膏醇沉后所含有的羟基红花黄色素A的量；去杂率（%）指除去杂质的量占清

7、膏含固量的百分比2.2.3醇沉优选结果由表5可以看出，50%乙醇沉淀时指标成分损失最大，去杂率较好，但沉淀呈泥沙状，滤过困难，可行性较差；60%乙醇沉淀时，指标成分损失较小，去杂效果较好，且沉淀呈絮状，静置后呈块状，易滤；70%乙醇沉淀时，指标成分损失和去杂效果均与60%醇沉接近。从节约成本和醇沉效果方面考虑最终确定去杂工艺为60%乙醇沉淀。3讨论文献报道〔4，5〕，红花及以红花为主的复方多采用水为提取溶媒，但羟基红花黄色素A的热稳定性较差，不宜长时间加热提取、浓缩。经实验比较，50℃温浸与热回流对红花