内标法研究甘遂及其炮制品的指纹图谱

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1、内标法研究甘遂及其炮制品的指纹图谱【摘要】目的建立甘遂饮片及其炮制品的指纹图谱。方法采用高效液色谱法：以胡薄荷酮作为内标参照物，乙腈水为流动相（梯度洗脱），流速1.0mL·min-1，检测波长235nm，柱温30℃。结果甘遂饮片及其醋制品共有17个共有峰；炮制品与生品比较，有2种成分含量增加约40%左右，1种成分含量减少达70%；17个共有峰的相似度均在0.95以上。结论该测定方法简便，准确，重现性好，所制定的甘遂指纹图谱具有可靠性，可控制甘遂及其炮制品的内在质量。【关键词】甘遂　高效液相色谱法　指纹图谱　

2、内标法　　Abstract:ObjectiveToestablishthefingerprintsofKansuiandtheirprocessedproducts.Methods　Pulegoneobilephaseconsistedofacetonitrileandcolumntemperature30℃．Keyethod　　甘遂为大戟科大戟属植物甘遂（EuphorbiakansuiT.N.LiouexT.P.illennium32数据处理系统；KromasilC18(4.6　mm×200　mm，5μm

3、)色谱分析柱（大连化学物理研究所）。　　胡薄荷酮对照品（纯度＞98%），批号：1052990，购自AldrichEhemicalpany,Inc；乙腈（色谱醇，美国Tedia公司）；自制重蒸去离子水。　　生甘遂饮片十批(陕西产编号0l,02,03，04批；山西产编号05,06批；河南产编号07,08批；市场统货09，10批)，醋甘遂饮片（陕西产编号Ol,02,03，04批；山西产编号05,06批；河南产编号07,08批；市场统货09，10批)，炮制品09、10批直接购自市场，其余均按炮制规范化的标准工艺炮制。

4、药材经本院中药鉴定教研室吴启南教授鉴定为大戟科大戟属植物甘遂（EuphorbiakansuiT.N.LiouexT.P.asilC18(4.6　mm×200　mm，5μm)为色谱柱。以水为流动相A，乙腈为流动相B，进行二元梯度洗脱：0～13min,5%～25%B；13～20min,25%～55%B；20～30min,55%～60%B；30～45min,60%～100%B；45～85min,100%B。流速：1.0mL·min-1，检测波长：235nm，进样量：10μL，柱温：30℃。　　2.2供试品溶液的制备

5、　　分别称取甘遂、醋甘遂粉末(过24目筛)约20g，加体积分数为95%的乙醇100mL回流提取，3次，每次2h，滤液浓缩，真空干燥，所得浸膏用甲醇溶于25mL容量瓶中至刻度，生品、醋制品分别加入2.5mL、2mL浓度为1mg·mL-1的胡薄荷酮作为内标参照物，所得混合液用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。HPLC分析前用0.45μｍ微孔滤膜过滤。　　2.3指纹图谱的方法学验证　　2.3.1稳定性试验取01号甘遂按“2.2”项方法制备溶液，分别于0、2、4、8、16、24h依法进行检测，获取指纹图谱。结果表明，各共有

6、峰相对保留时间及相对峰面积（RSD）均＜3%。表明24h内供试品溶液的成分稳定。　　2.3.2精密度试验取01号甘遂按“2.2”项方法制备溶液，依法连续进样5次，对主要色谱峰的相对保留时间及相对峰面积进行比较，RSD均＜3%。　　2.3.3重现性试验取批号为01的样品，按“2.2”项方法制备溶液5份，同法检测，以胡薄荷酮为对照，各共有峰相对保留时间及相对峰面积RSD均＜3%。　　2.4结果　　2.4.1甘遂指纹图谱按供试品溶液制备方法，制备4个产地生品、醋制甘遂各10批的样品溶液。按“2.1”项下条件测定，记

7、录色谱图并进行分析，结果17个峰是所有样品共有的峰，确定其为指纹峰，生品、醋制甘遂各10批样品的指纹图谱见图1、图2，HPLC参照指纹图见图3。　　2.4.2相似度评价采用国家药典委员会《中药指纹图谱相似度评价系统2004A版》对上述年终批次药材的指纹图谱进行了相似度的分析，以相关系数（中位数）代表其相似度，得10批生品的相似度分别为：0.982、0.986、0.996、0.995、0.997、0.981、0.989、0.990、0.991、0.981。10批醋制品的相似度分别为：0.991、0.975、0.

8、984、0.990、0.991、0.989、0.991、0.987、0.994、0.986。结果生品及醋制品的相似度均在97%以上。　　3讨论　　3.1通过DAD检测器对样品进行波长200～400nm处扫描，并查阅文献，经综合考虑，235nm处色谱峰较多，峰吸光度较大且峰形较好，故选择235nm作为测定波长。本文曾比较了汉邦LichrospherC18(4.6　mm×20cm)，〕.北京:化学工业出