野生稻, 常规稻和杂交一代植株内生菌脂肪酸生物标记比较

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1、47第12卷2010第4期目录野生稻、常规稻和杂交一代植株内生菌脂肪酸生物标记比较1苦瓜枯萎病病原的鉴定及植株体内菌量测定5阿维菌素的结构改造：C-5位羟基的保护(Ⅰ)10摇床发酵过程中时间对芽孢杆菌JK-2数量变化与抑菌活性变化的影响16柑橘黄龙病植株茎内生菌脂肪酸的多样性分析19青枯病生防菌ANTI-8098A:pCM20对不同性质土壤中微生物的影响30杨桃遗传多样性分析引物筛选35台湾地区土壤标本细菌的分离37芽孢杆菌JK-2发酵液有机提取物对大肠杆菌的生物活性41镰刀菌在辣椒植株体内的分布44不同保鲜剂对龙眼果

2、实好果率的比较46封面图片简介封面图片为本研究中心成功进行的尖孢镰刀菌转绿色荧光蛋白基因的图片。建立并优化了PEG-CaCl2介导的原生质体转化体系，成功地将绿色荧光蛋白基因（GFP）转入到西瓜尖孢镰刀菌FOV-135中。每微克质粒可获得4-6个转化子，连续转接5代能够稳定遗传，荧光强度良好。PCR验证GFP基因已整合进转化子基因组DNA中。该GFP转化菌株可为西瓜枯萎病的侵染与防治的相关研究奠定基础。47第12卷2010第4期野生稻、常规稻和杂交一代植株内生菌脂肪酸生物标记比较胡桂萍1，2，史怀1，刘波1*项目名称：

3、国家863计划项目（2006AA10A211），福建省财政专项-福建省农业科学院科技创新团队建设基金（STIF-Y03），福建省科技厅重点项目（2007N2010）；福建省自然科学基金（2008J0054） 。作者简介：胡桂萍，女，硕士研究生，从事植物病害生防研究。*通讯作者：刘波，博士、研究员，从事生物技术与生物防治研究，E-mail：fzliubo@163.com。（1.福建省农科院农业生物资源研究所，福州350003；2.福建农林大学，福建福州350003）1引言植物内生菌是生活于健康植物的各种组织和器官内部的细

4、胞间隙或细胞内，并与寄主植物建立起和谐联合关系的一类微生物。内生菌在植株体内具有稳定的生存空间，不易受外界环境的影响，在长期的进化过程中，与寄主植物形成互惠互利的关系。由于许多微生物都是非可培养的，研究发现分离到的微生物仅占1％，所以传统上，通过依赖培养方法和显微技术，即采用图选择性培养基分离出纯菌株后进行鉴定，对于微生物群落结构多样性研究还远远不够。磷脂是所有生物活细胞重要的膜组分，在真核生物和细菌的膜中磷脂分别占约50％和98％。PLFA是磷脂的构成成分，它具有结构多样性和生物特异性，环境中PLFA的存在及其丰度可

5、揭示特定生物或生物种群的存在及其丰度。磷脂在细胞死亡后快速降解，故用以表征微生物群落中“存活”的那部分群体。总之，通过对PLFA的定量测定可完成对了解微生物活细胞生物量的测定，并可通过根据PLFA分析的种类了解环境中微生物群落结构。本实验采用磷脂脂肪酸（PLFA）法，提取野生稻，常规稻和杂交一代三个品种水稻植株茎部脂肪酸，并进行气相分析，从而得到不同品种水稻茎部内生菌群落结构差异。2材料与方法2.1材料（1）水稻品种，野生稻、常规稻、杂交一代、组培苗（对照）。（2）脂肪酸提取试剂：[试剂1]0.2MKOH甲醇溶液；甲醇

6、（HPLCgrade）300ml，KOH3.3666g。[试剂2]1.0M冰醋酸溶液（分析纯）：3.45ml冰醋酸＋56.55ml超纯水（共60ml）。[试剂3]正己烷(HPLCGrade)。[试剂4]1：1的正己烷与甲基叔丁基醚（MTBE）混合液：正己烷（HPLCGrade）10ml，MTBE(HPLCGrade)10ml。2.2样品前处理取水稻茎部（距根部10cm－15cm）10g，先用75％酒精浸泡数秒，无菌水冲洗数次后，再用10％次氯酸钠浸泡5min，无菌水冲洗数次后用无菌滤纸吸干表面水分，然后用无菌剪刀剪碎样

7、品在无菌研钵中，充分研磨匀浆，转移到50ml离心管中。2.3脂肪酸提取步骤（1）脂肪酸的释放与甲酯化：取10g土样于50ml离心管中，加入15ml溶液1，斡旋震荡5min，并于37℃47第12卷2010第4期水浴温浴1h,每10min斡旋样品一次。（2）中和溶液pH：加入3ml溶液2，充分摇匀。（3）脂肪酸的萃取：加入10ml正己烷，充分摇匀，800r/min离心15min，打开管盖，上层正己烷于干净玻璃试管中，氮气吹干使溶剂挥发。注意：此过程要小心，宁可少取有机相，绝不可吸入甲醇相，否则会损坏气相色谱仪的色谱柱。（4

8、）转移：在玻璃试管中加入0.5ml溶液4，充分溶解3-5min，转入GC小瓶，用于脂肪酸测定。2.4脂肪酸的检测PLFAs的检测采用美国MIDI公司生产的微生物自动鉴定系统(SherloсkMiсrobialIdentifiсa-tionSystem)，包括Agilent6890N型气相色谱仪，全自动进样装置、石英毛细管柱及氢火焰