柔肝散结法对肝癌大鼠干预作用的研究

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1、柔肝散结法对肝癌大鼠干预作用的研究【摘要】　　目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及环氧合酶-2（COX-2）在肝癌大鼠中的表达以及柔肝散结法对其表达的影响。方法40只雄性SD大鼠，随机分为空白组、模型组、青消方组、青消方防治组（简称“防治组”），每组10只。除空白组外，其余3组大鼠均以含0.05%2-AAF的饲料喂养12周，防治组在诱癌的同时灌服青消方。青消方组于诱癌第4周开始给药，剂量均为25g·kg-1·d-1。12周末观察瘤体积及瘤重量的变化，并采用免疫组织化学方法检测各组大鼠标本中VEGF及COX-2的表达。结果模型组VEGF及COX-2的表达明显高于空白组(P0.01)；青

2、消方组、防治组VEGF及COX-2的表达明显低于模型组(P0.01)；防治组优于青消方组。结论VEGF及COX-2在肝癌大鼠中表达增强，柔肝散结中药青消方能降低肝癌大鼠VEGF及COX-2的表达，早期治疗效果更佳。【关键词】柔肝散结法；肝癌大鼠；血管内皮生长因子；环氧合　　Abstract：ObjectiveToapproachtheexpressionoftheVEGFandCOX-2inrats:blankgroup,modelgroup,QingXiaoFanggroup,FangZhigroup,10ratsineverygroup.Exceptforblankgroup,th

3、eotherthreegroupseandthemunehistochemicalmethod.ResultsTheexpressionofVEGFandCOX-2inmodelgroupodelgroup(P＜0.01),FangZhigroupsurpassedQingXiaoFanggroup.ConclusionTheexpressionofVEGFandCOX-2entedinratsa公司。　　1.2实验过程及观察指标　　40只雄性SD大鼠，体重（120±10）g，随机分为空白组、模型组、青消方组、青消方防治组（简称“防治组”），每组10只。空白组以标准颗粒饲料喂养，其余3

4、组大鼠均以含0.05%2-AAF的饲料喂养12周，防治组在诱癌的同时，灌服青消方25g/（kg·d）。青消方组于诱癌第4周开始给药，剂量为25g/(kg·d)。空白组和模型组给以等体积的蒸馏水。各组每日灌药3h前后均禁食。12周末处死大鼠，解剖腹腔，取出肝脏，观察肝脏大体形态，测定瘤体积及瘤重量。各组用10%福尔马林液固定，石蜡包埋，制备成4μm厚的切片，用于VEGF及COX-2免疫组织化学检测，明确其在蛋白方面的表达。　　1.3统计学处理　　使用SPSS11.5forwindows统计软件，所有数据均用均数±标准差表示，采用单因素方差分析法对实验结果进行统计学分析。　　2结果　　2.

5、1各组瘤体积和瘤重量的比较　　青消方组、防治组与模型组相比，瘤体积缩小，瘤重量降低，有明显差异（P＜0.01）；防治组瘤体积缩小及瘤重量降低优于组青消方组（P＜0.01）。表1实验末各组瘤体积及瘤重量的测定结果（略）　　2.2COX-2及VEGF免疫组化结果　　VEGF及COX-2蛋白主要分布于细胞浆中，VEGF阳性细胞显示棕黄色或棕褐色颗粒；COX-2阳性结果呈棕黄色颗粒。4组大鼠每组选取10只大鼠标本，每个标本测量10个高倍镜视野。用阳性染色面积和显示屏面积的百分比表示该成分的相对含量。结果显示，模型组、青消方组及防治组VEGF和COX-2相对含量与空白组相比明显升高，有显著性差异

6、（P＜0.01）；青消方组、防治组与模型组相比均明显降低，有显著性差异（P＜0.01）；防治组明显低于青消方组（P＜0.05）。表2实验末各组肿瘤组织VEGF及COX-2的相对含量（略）　　3讨论研究表明，滋阴养血药物擅长保护骨髓功能，增加血液的白细胞、血红蛋白和血小板；软坚散结类药物能直接抑制、杀伤癌细胞，减少肿瘤细胞转移。因此我们采用具有益气柔肝、软坚散结作用的中药青消方为研究对象。青消方由太子参、白芍、绞股蓝、灵芝、冬凌草、鳖甲、蛇六谷等组成。现代药理研究显示蛇六谷具有明显抑瘤作用，在荷瘤小鼠体内有一定抑瘤率，达30.44%～42.25%〔1〕；绞股蓝的抗癌成分中，以20（S）原

7、人参二醇抗肿瘤活性最高；从苦参中提取的苦参碱具有诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡等作用。　　近年来研究表明，COX-2在绝大多数的肝细胞癌组织内呈过度表达〔2〕。COX-2与VEGF的研究主要集中在与肿瘤的发生发展的关系上〔3〕。本实验通过COX-2与VEGF在肝癌大鼠中的表达，探讨中药复方青消方在控制肿瘤发生、发展过程中的作用。研究表明，血管生成是肿瘤发生、发展过程中的重要步骤，与肿瘤的生物学行为及患者预后有关。VEGF通过与其受