关于杜仲3类有效成分检测中应用多波长高效液相色谱法测定的结果分析

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1、关于杜仲3类有效成分检测中应用多波长高效液相色谱法测定的结果分析【摘要】目的研究采用多波长高效液相色谱法测定杜仲3类有效成分的效果。方法采用DionexC18柱以及流动相组成一种甲醇-0.1%磷酸水来进行梯度洗脱操作，对杜仲中的3类有效成分进行测定，分析测定结果。结果进行色谱峰分离的效果较好，多波长高效液相色谱法能够对杜仲中的桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸以及京尼平苷酸进行同时测定，其中桃叶珊瑚苷的含量为0.67%，松脂醇二葡萄糖苷的含量为0.45%，绿原酸的含量为3.16%，京尼平苷酸的含量为1.12%。结论多波长高效液相色谱法测

2、定杜仲3类有效成分的效果显著，操作简单，具有较好的重现性，能够为杜仲内在质量的控制提供科学有效的依据。中国6/vie　　【关键词】多波长高效液相色谱法；杜仲；有效成分　　DOI：10.14163/j.ki.11-5547/r.2017.01.096　　杜仲属于一种名贵的中药材，具有利尿、安胎、坚筋骨以及降血压等诸多功效[1]。该药物的主要化学成分包括杜仲胶、多糖、黄酮、苯丙素类、环烯醚萜类以及木脂素类等。部分学者对杜仲中的桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷以及京尼平苷酸等进行了测定，这4种物质属于杜仲的主要药效成分，可以将其概括为3大类

3、，在测定上具有较大的难度[2-6]。本研究主要探讨多波长高效液相色谱法测定杜仲3类有效成分的效果，总结如下。　　1仪器与试剂　　1.1仪器超声波清洗器（频率为25kHz，功率为250ate高效液相色谱仪。　　1.2试剂二次蒸馏水；甲醇（色谱纯）；杜仲皮（产地：山东）；京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸对照品。　　2方法　　2.1制备供试品溶液称取50g杜仲药材，将其研制成为絮状粉末，取2g左右的样品粉末，将其放置在具塞锥形瓶中，将60ml75%的甲醇加入，对其进行称重，进行30min的超声提取，冷置，对其进行称重，将减失的重

4、量补足，然后再将其滤过，药渣再重复上述操作一次。进行两次滤液处理之后将其减压浓缩，并且采用相同浓度的甲醇溶液对其进行定容，一直到20ml，对其进行均匀摇晃，采用0.45μm的微孔滤膜对其进行滤过，最后获得供试品溶液。　　2.2制备对照品溶液称取适量的京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸对照品，将其放置在容量瓶中（10ml），将色谱纯甲醇加入到其中，将其溶解，并将其稀释到刻度，对其进行摇晃，将其制备成为对照品混合储备液，具体的浓度：桃叶珊瑚苷为0.70g/L、松脂醇二葡萄糖苷为0.50g/L、绿原酸为3.32g/L、京尼平苷酸为

5、1.20g/L，采用冷藏的方式进行保存。　　2.3色谱具体条件进样量为10μl；检测波长分别为320、280、240、210nm；柱温为25℃；流速为1.0ml/min；流动相为甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱；色谱柱为DionexC18柱（250mm×4.6mm，5μm）。　　3结果与分析　　3.1优化提取条件提取方法采用回流法与超声法，根据已经拟定好的色谱条件，分别采用两种提取方式对提取的样品进行测定，将4种有效成分的峰面积之和作为考察的具体指标，结果显示出两种提取方法不具备较大的差异性，但是超声提取这种方式具有快捷、简单等优点，所以最终

6、选用超声提取法对样品进行提取。　　3.2优化超声提取条件称取2g杜仲药品，一共有9份，对超声提取杜仲中主要活性成分提取时间、提取次数、料液比以及溶解浓度等影响因素进行L9（34）正交试验[7-10]，结果显示最好的提取方案�椋毫弦罕�1g/30ml、75%甲醇、进行3次超声提取，将每次提取的时间控制在30min。其次，结果显示料液比对杜仲中主要成分的提取影响最大，其次为提取次数、甲醇浓度、反应时间。　　3.3优化色谱条件检测波长的选择：对样品采用PDA-3000光电二极管进行全波长扫描，为了能够达到干扰小、吸收强的目的，对京尼平苷酸、桃叶

7、珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸各物质的光谱性质差异进行利用，将3D-plot图谱作为依据，最终决定采用四波长进行检测[11-13]，具体为：320nm测定绿原酸、280nm测定松脂醇二葡萄苷、240nm测定京尼平苷酸、210nm测定桃叶珊瑚苷。在这种条件下，能够获得最多的图谱信息量，并且具有较好的峰形，基线平稳，溶剂受到的干扰少，能够对各种物质进行准确的分析。　　优化流动相：对甲醇-乙腈、乙腈-水、甲醇-水分别进行梯度洗脱比较，结果显示，在甲醇-水位流动相时，分离较好，出峰较多，但是会有拖尾现象出现，所以将磷酸快加入到流动相中，以此来达

8、到消除拖尾的目的。结果显示，甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱时，能够获得理想的色谱峰分离度以及峰形，具有较好的程序稳定性。　　3.4方法学考证线性关系考察：采用流动相溶液将对照品储备液稀释，并且配