探讨多波长高效液相色谱法测定杜仲

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2、、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸对照品。2方法2.1制备供试品溶液称取50g杜仲药材，将其研制成为絮状粉末，取2g左右的样品粉末，将其放置在具塞锥形瓶中，将60ml75%的甲醇加入，对其进行称重，进行30min的超声提取，冷置，对其进行称重，将减失的重量补足，然后再将其滤过，药渣再重复上述操作一次。进行两次滤液处理之后将其减压浓缩，并且采用相同浓度的屮醇溶液对其进行定容，一直到20ml，对其进行均匀摇晃，采用0.45Pm的微孔滤膜对其进行滤过，最后获得供试品溶液。1.2制备对照品溶液称取适量的京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸

3、对照品，将其放置在容量瓶中(10ml)，将色谱纯甲醇加入到其中，将其溶解，并将其稀释到刻度，对其进行摇晃，将其制备成为对照品混合储备液，具体的浓度：桃叶珊瑚苷为0.70g/L、松脂醇二葡萄糖苷力0.50g/L、绿原酸为3.32g/L、京尼平苷酸为1.20g/L,采用冷藏的方式进行保存。2.3色谱具体条件进样量为10ul;检测波长分别为320、280、240、210nm；柱温为25°C;流速为1.0ml/min;流动相为甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱；色谱柱为DionexC18柱(250mmX4.6mm,5Um)o3结果与分析3.1优化提

4、取条件提取方法采用回流法与超声法，根据己经拟定好的色谱条件，分别采用两种提取方式对提取的样品进行测定，将4种有效成分的峰面积之和作为考察的具体指标，结果显示出两种提取方法不具备较大的差异性，但是超声提取这种方式具有快捷、简单等优点，所以最终选用超声提取法对样品进行提取。2.2优化超声提取条件称取2g杜仲药品，一共有9份，对超声提取杜仲中主要活性成分提取时间、提取次数、料液比以及溶解浓度等影响因素进行L9(34)正交试验[7-10],结果显示最好的提取方案?椋毫弦罕？1g/30ml、75%中醇、进行3次超声提取，将每次提取的时间控制在3

5、0min。其次，结果显示料液比对杜仲中主要成分的提取影响最大，其次为提取次数、屮醇浓度、反应时间。1.3优化色谱条件检测波长的选择：对样品采用PDA-3000光电二极管进行全波长扫描，为了能够达到干扰小、吸收强的目的，对京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸各物质的光谱性质差异进行利用，将3D-plot图谱作为依据，最终决定采用四波长进行检测［11-13］，具体力：320nm测定绿原酸、280nm测定松脂醇二葡萄苷、240nm测定京尼平苷酸、210nm测定桃叶珊瑚苷。在这种条件下，能够获得最多的图谱信息量，并且具有较好的峰形

6、，基线平稳，溶剂受到的干扰少，能够对各种物质进行准确的分析。优化流动相：对甲醇-乙腈、乙腈-水、甲醇-水分别进行梯度洗脱比较，结果显示，在中醇-水位流动相时，分离较好，出峰较多，但是会有拖尾现象出现，所以将磷酸快加入到流动相中，以此来达到消除拖尾的S的。结果显示，甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱时,能够获得理想的色谱峰分离度以及峰形，具有较好的程序稳定性。3.4方法学考证线性关系考察：采用流动相溶液将对照品储备液稀释，并且配备成为对照品系列溶液，桃叶珊瑚苷：0.08、0.17、0.35、0.70、1.40g/L；松脂醇二葡萄糖苷：0.06

7、、0.12、0.25、0.50、1.0g/L；绿原酸:0.42、0.83、1.66、3.32、6.64g/L；京尼平苷酸：0.15、0.30、0.60、1.20、2.40g/L。分别进样5ul,对-其进行55次平行测定，结果显示，京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸的峰面积和其进样浓度具有良好的线性关系。方法的稳定性、重复性以及回收率分析：选取相同批次的5份供试品，采用供试品溶液制备以及检测方法对其进行测定，对其秉复性的RSD进行计算，结果显示，在24h内，试品溶液具有较好的稳定性，并且实验的重复性好。3.5杜仲样品测定取

8、约2g的杜仲样品粉末，对其进行精密称定，放置在具塞锥形瓶中，采用优化后的提取方案提取样品，并且在最优色谱条件下对其进行测定，结果分别在320、280、240、210nm的波长条件下进行检测，最终结果显示，桃叶珊瑚苷的含量