林氏咽宁散体外抗金黄色葡萄球菌实验

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1、林氏咽宁散体外抗金黄色葡萄球菌实验【关键词】林氏咽宁散；,,金黄色葡萄球菌；,,抗菌实验　　摘要：目的探讨林氏咽宁散体外对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。方法以微生物试验琼脂平皿法、液体试管法观察其抗菌作用。结果对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌作用。琼脂平皿法最低抑菌浓度（MIC）为0.1g/ml，液体试管法最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）均为0.025g/ml。结论实验结果表明，林氏咽宁散体外抗菌活性测定显示，对金黄色葡萄球菌有一定的抗菌作用，与其相关的临床功能主治相符，为其临床应用提供了一定的实验基础。　　关

2、键词：林氏咽宁散；金黄色葡萄球菌；抗菌实验　　林氏咽宁散系采用著名老中医祖传经验方，运用先进工艺制成的纯中药散剂。主要有凤凰衣、藏青果、薄荷叶、人工牛黄、珍珠粉、冰片、黄柏等10味中药组成。用于治疗急慢性咽炎等。本实验对林氏咽宁散进行体外抗金葡菌实验，为临床应用提供一定的实验基础。　　1材料　　1.1药品林氏咽宁散（常州市中西医结合医院，批号050829，钴60辐射灭菌），青霉素－V钾片0.25g（SandozGmbH,Kundl－Austria，批号133590），锡类散（江苏天士力制药有限公司，批号0502002

3、）。　　1.2菌种金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus〔CMCC(B)26003〕(中国药品生物制品检定所)。　　1.3培养基〔1〕　　1.3.1Mueller－Hinton（M-H）肉汤培养基成分：牛肉浸膏3g，纯水1000ml，可溶性淀粉1.5g，酪蛋白水解物17.5g。制法：将上述各成分混合，摇匀，调pH至7.4，分装，灭菌，备用。　　1.3.2Mueller－Hinton琼脂（MHA）培养基成分：M-H肉汤1000ml，琼脂17g。制法：将琼脂加入M-H肉汤内，加热溶解，分装，灭菌，备用。　

4、　2方法与结果　　2.1最小抑菌浓度（MIC）与最小杀菌浓度（MBC）的测定　　2.1.1平皿二倍稀释法〔1〕采用琼脂稀释法，用Mueller－Hinton琼脂（MHA）培养基对林氏咽宁散进行定量抗金葡菌试验。　　2.1.1.1药液稀释称取林氏咽宁散6g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液30ml振摇，混匀，即为0.2g/ml供试液。取青霉素－V钾片1片，研磨，用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液溶解并稀释至0.000025g/ml（相当于青霉素V42.375u/ml）的溶液，作为药物对照液。取锡类散3g，加pH7

5、.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液15ml振摇，混匀，即为0.2g/ml的对照液。取无菌空试管6支，第1管中放入林氏咽宁散供试液（0.2g/ml），第2～6管中分别加5mlpH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液，于第1管中取出5ml放入第2管中，混匀，即为0.1g/ml的供试液，同法从第2管取出5ml放入第3管，如此连续稀释至第6管，供试溶液的含药浓度依次为：0.2，0.1，0.05，0.025，0.0125，0.00625g/ml。取无菌空试管6支，同法将锡类散依次稀释成0.2，0.1，0.05，0.025，0.0125，0

6、.00625g/ml的溶液。　　2.1.1.2含药平皿制备分别取上述供试液与对照液1ml加入无菌平皿中，然后分别加入相同量的Mueller－Hinton琼脂（MHA）培养基15ml，充分摇匀，开盖，在净化台上适当消除冷凝水，待培养基凝固。同一浓度的药液平行做2个平板。用吸管吸取0.1ml金黄色葡萄球菌稀释液（金葡菌浓菌液用灭菌的0.9％氯化钠溶液10倍系列稀释至10-3，经测定活菌数为82000cfu/ml）于上述各平板上，用接种棒均匀涂抹于整个平板。同时设一份不含药物的Mueller－Hinton琼脂（MHA）培养

7、基平板作为阳性菌生长对照；一份含药物但不含实验菌的空白对照；一份pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液与Mueller－Hinton琼脂（MHA）培养基混合的稀释剂对照。2.1.1.3培养、观察结果将制备好的平板置35℃培养18～24h后，观察各平板是否有金葡菌生长，金葡菌不生长的最低药物浓度，即为金葡菌的最低抑菌浓度。结果见表1。　　表1平皿法抑菌实验结果（略）　　＋表示试验皿长菌；－表示试验皿未长菌　　结果证实，青霉素V钾对金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕高度敏感。林氏咽宁散对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用

8、，固体平皿法最低抑菌浓度为0.1g/ml。而锡类散在此系列浓度下对金葡菌的抑菌作用不明显。　　2.1.2液体试管法〔1，2〕采用液体培养基倍比稀释法，用Mueller－Hinton（M-H）肉汤培养基对林氏咽宁散进行定量抗金葡菌试验。　　2.1.2.1药液稀释取无菌空试管10支，于10支试管中加入Mueller－Hinton（M-H）肉汤培养基